按照GB/T 6194—1986《水果、蔬菜可溶性糖》的測定標準進行測定。
1.適用範圍
適用於新鮮水果、蔬菜、幹果可溶性糖的測定。
2.測定原理
在沸熱條件下,用還原糖溶液滴定一定量的費林試劑時將費林試劑中的二價銅還原為一價銅,以亞甲基藍為指示劑,稍過量的還原糖立即使藍色的氧化型亞甲基藍還原為無色的還原型亞甲基藍。
3.儀器設備
a.高速組織搗碎機;
b.電熱恒溫水浴;
c.1000W調溫電爐;
d.玻璃儀器:200mL、250mL容量瓶,250mL錐形瓶,50mL堿式滴定管。
4.試劑配製
(1)費林試劑甲稱取硫酸銅(CuSO4·5H2O,分析純)34.6g溶於水中,稀釋至500mL,過濾,貯於棕色瓶內。
(2)費林試劑乙稱取氫氧化鈉50g和酒石酸鉀鈉(KNaC4O6H4·4H2O,分析純)138g溶於水中,稀釋至500mL,用石棉墊漏鬥抽濾。
(3)轉化糖標準溶液稱取9.5g蔗糖(分析純)用水溶解後轉入1000mL容量瓶中,加入6MHCl(分析純)10mL,加水至100mL。在20~25℃下放置3d或在25℃保溫24h,然後用水定容(此為酸化的1%轉化糖液,可保存3~4個月)。測定時,取1%轉化糖液25.00mL放入250mL容量瓶中,加入甲基紅指示劑一滴,用1mol/L NaOH溶液中和後用水定容,即為1mg/mL轉化糖標準溶液。
(4)亞甲基藍溶液稱取0.5g亞甲基藍(分析純)溶於100mL水中。
(5)乙酸鋅溶液稱取21.9g乙酸鋅〔Zn(OAC)2·2H2O,分析純〕溶於水中,加冰乙酸3mL,稀釋至100mL。
(6)亞鐵氰化鉀溶液稱取10.6g亞鐵氰化鉀〔K4Fe(CN)6·3H2O,分析純〕溶於水,稀釋至100mL。
5.樣品提取液製備
取待測樣品適量,洗淨,用不鏽鋼刀將可食部分切成適當小塊充分混勻後,按四分法取樣。稱取100g鮮樣加入等重量的水,放入組織搗碎機中搗成1∶1勻漿,有些材料勻漿比例可適當調整,多汁果蔬類可直接搗漿。稱取勻漿25.0g或50.0g(相當於樣品12.5g或25.0g)放入150mL燒杯中,含有機酸較多的材料加0.5~2.0g粉狀CaCO3調至中性(廣泛試紙檢試)。用水將樣液全部轉入250mL容量瓶中,並調整體積約為200mL。置(80±2)℃水浴保溫30min,其間搖動數次,取出加入乙酸鋅溶液及亞鐵氰化鉀溶液各2~5mL,冷卻至室溫後,用水定容,過濾備用。
6.還原糖測定
(1)費林試劑的標定取費林試劑甲、乙各5.00mL或在測定前先等體積混合後取10.00mL混合液於250mL錐形瓶中,放入玻璃珠4~5粒,先加入比預測(按6.2進行預測)僅少0.5mL的1mg/mL轉化糖標準液。將此混合液置1000W電爐上加熱,使其在2min左右沸騰,準確煮沸2min,此時不離開電爐,立即加入0.5%亞甲基藍指示劑6滴,並繼續以每4~5s的滴速滴加標準糖液,直至二價銅離子完全被還原生成磚紅色氧化亞銅沉澱,溶液藍色褪盡為止。用準確滴定標準糖液的體積(mL)v1,乘以標準糖液濃度(mg/mL),即得與10mL費林試劑所相當質量的糖(g)。
注:無色的還原型亞甲基藍極易被空氣中的氧所氧化,應調節電爐溫度使瓶內溶液始終保持沸騰狀態,液麵覆蓋水蒸氣不與空氣接觸。整個滴定過程錐形瓶不能離開電爐隨意搖動。
(2)預測取費林試劑甲、乙各5.00mL或10.00mL混合液於250mL錐形瓶中,由滴定管加入待測糖液約15mL,在電爐上加熱至沸,約沸15s後迅速滴加待測糖液,至呈現極輕微的藍色為止,此時加入0.5%亞甲基藍指示劑6滴,繼續滴加待測糖液,直至溶液藍色褪盡為止,記下待測糖液的用量v2(mL)。