第一節白及膠的測定
一、白及膠測定實驗方法
白及膠是從蘭科植物白及（Bletillastriata）中提取的一種多糖成分，是中藥白及的主要成分。將新鮮白及去根煎煮5min左右無白心，取出切片，置於80℃下烘幹，將其打成粗粉。稱取10g粗粉置於燒杯內，加入定量水冷浸，放入恒溫水浴鍋內不斷攪拌1~2h後得無色透明膠液，將膠液加熱濃縮至2:1的體積，冷卻，攪拌下緩慢加入2倍體積乙醇靜止過夜，抽濾得沉澱物在90℃下烘幹;濾液回收乙醇。
根據白及所含多糖成分的理化性質和預試驗結果，認為對白及膠提取得率的影響主要有提取時間、醇沉濃度、加水量等。本試驗為了選擇適當的提取白及膠的條件，以白及膠的得率為指標，以L9（34）進行設計，其因素水平試驗和分析結果。
二、結果與分析
從方差分析結果表明，因素C，D對試驗結果的影響非常顯著，因素A也有顯著影響，選取顯著因素的最高水平，得到最佳工藝條件為A3C3D2，次要因素B可依據試驗條件選取B2，最終的較優方案為A3B2C3D2。
根據以上試驗得最佳方案為A3B2C3D2可進行以下試驗：此前幾組實驗采用的白及均為烘幹後的藥用白及塊莖，本組實驗采用的是從遵義市采取的，分別取一定量新鮮白及且將其一年生、二年生、三年生分開，由於一年生幾乎腐爛或掉去，故不便進行試驗，所以隻考察二、三年生對白及的提取率的影響，在同樣提取條件下三年生白及提取率高於二年生。
同樣，以以上得到的最佳方案A3B2C3D2進行不同產地對白及的提取率的影響。
第二節白及化學成分測試分析
一、白及不同時期化學成分測試
根據白及的生長狀況，2011年8月至2012年2月份之間進行了白及的1，4－二[4-（葡萄糖氧）苄基]－2－異丁基蘋果酸酯（英文名稱militarine）含量測定，研究結果發現冬季至春初militarine的含量較高，這在一定程度上支持了白及冬季采挖的合理性。
二、白及初加工方法影響藥材成分
白及陰幹、直接曬幹或高溫幹燥等不同幹燥方式的初加工方法對其質量的影響做進一步研究。
（一）樣品采集加工、浸出物和militarine含量測定
色譜條件：照高效液相色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD
供試品製備：按精密度項下供試品製備方法製備供試品液。
色譜條件：
色譜柱：依利特ods柱200*4.6mm，5μm檢測器為二極管陣列檢測器
流動相：A：0.02%磷酸水溶液63B：甲醇37
柱溫：40℃
流速：1ml/min
吸取供試品溶液10μl注入高效液相色譜儀，測定，即得。
（二）不同炮製方法白及飲品浸出物和militarine含量測定
貴州省農業科學院試驗基地提供的14個白及樣品。分別按2005版《藥材炮製規範》白及項下炮製方法“洗淨，潤透，切薄片，曬幹”和2010年版《中國藥典》一部，白及項下的“除去須根，洗淨，置沸水中煮或蒸至無白心，曬半幹，除去外皮，曬幹”炮製。由於白及鮮藥材富含糖且含水量較高，不及時幹燥容易發黴變質。所以我們把原炮製項下的曬幹改為低溫烘幹（60℃）
以上結果可以看出：白及經炮製以後militarine含量及浸出物的量都有所增加，增加的幅度蒸>煮>直接切片幹燥。因而白及產地加工炮製時宜采用“除去須根，洗淨，蒸至無白心，除去外皮，切片，及時幹燥”的方法不同采集時間及市售白及藥材的水分、灰分及酸不溶性灰分、浸出物、militarine含量變化
第三節白及野生與栽培生物活性對比研究
一、白及野生和栽培品種抗胃潰瘍的實驗研究
（一）實驗材料
昆明種小鼠，雌雄各半，體重為18～22g；SD大鼠，30隻，雌雄各半，體重為180～220g。兩種鼠均由蘇州大學實驗動物中心提供，動物合格證號:SCXK（蘇）2002－0008。
（二）藥品與試劑
白及野生品種提取物（A）、栽培品種提取物（B）、BT01（C）、BT02（D）、
BT03（E）均由貴州益佰藥業股份有限公司提供；西咪替丁（批號：H31022889）由上海衡山藥業有限公司生產；鹽酸雷尼替丁（批號：H32022760）由蘇州第三製藥廠有限責任公司生產；硫糖鋁（批號：H32024513）由南京白敬宇製藥有限責任公司生產；MAD、SOD檢測試劑盒由南京建成生物研究所生產；無水乙醇、冰醋酸、甲醛等均由國藥集團化學試劑有限公司提供。
（三）儀器與設備
22PC型電子分析天平由上海精密科學儀器有限公司生產；旋渦混勻器由上海滬西儀器廠生產；HH－S型數顯恒溫水浴鍋由鞏義市英峪予華儀器廠生產JA5003N分光度計由上海棱光技術有限公司生產；TDL－60B型離心沉澱器由上海安亭科學儀器廠生產；可調式封閉電爐由上海錦凱科學儀器有限公司生產。
（四）實驗方法與結果分析
1.對無水乙醇致小鼠胃潰瘍的預防作用
昆明種小鼠195隻，雌雄各半，將小鼠隨機分成13組，每組15隻，分別為正常對照組，溶媒對照組，白及野生品提取物（50，100，200mg/kg）各劑量組，白及栽培品提取物（50，100，200mg/kg）各劑量組，硫糖鋁組（280mg/kg）和西咪替丁組（400mg/kg）。小鼠正常進食飲水，溶媒對照組灌胃給予0.5%㎝C0.2ml/隻/天，其他組分別按照上述劑量灌胃給藥，連續5d。第6d，小鼠自由飲水，禁食24h後，每組均正常給藥，30min後，各組均灌胃給予無水乙醇（0.2ml/隻），1h後脫臼處死小鼠。將小鼠剖腹，遊離胃，沿胃大彎剪開，用生理鹽水衝去內容物，置於10%中性福爾馬林溶液10min後，取出展平，各組光鏡下觀察胃黏膜的組織學變化，並按Guth標準計算潰瘍指數和抑製率：按潰瘍或糜爛麵積大小給予計分：①每3個點狀潰瘍（黏膜缺損小於1mm或者出血性糜爛小點，稱點狀潰瘍），計1分。②條狀出血：以遊標卡尺測量潰瘍的最大長徑和垂直於最大長徑的最大寬徑，二者的乘積即為潰瘍指數。寬為1mm者每mm長為1分；2mm寬者每mm長為2分；3mm寬者每mm長為3分。
計算潰瘍抑製率：潰瘍抑製率=（平均模型組潰瘍指數—平均實驗組潰瘍指數）/平均模型組潰瘍指數×100%
2.對大鼠乙酸型胃潰瘍的治療作用
SD大鼠30隻，禁食12h後，按Okabe法改良進行造模。大鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉後，用酒精棉球消毒皮膚，無菌操作，自劍突正中向下沿腹中線，剪約2㎝開口，輕輕拉出胃，在腺胃部前壁竇體交界處漿膜麵貼上浸透冰醋酸的圓形濾紙（直徑5mm）30s，重複3次，用棉簽吸幹，生理鹽水衝洗後，將胃輕輕送回，逐層縫合腹膜、腹壁肌層及皮膚，再次消毒皮膚，術後常規喂養，第2日將動物隨機分成5組，每組6隻，雌雄各半，分別為對照組（1.0ml/kg生理鹽水），白及野生品或栽培品提取物（25，50，100mg/kg）劑量組，陽性藥雷尼替丁組（30mg/kg）。於分組當天開始灌胃給藥，每天給藥1次，連續5d。末次給藥後12h後脫頸椎處死動物，處死前摘眼球取血（5～8ml），4000r/min離心20min，分離血清，留存備用。剖腹取胃，沿胃大彎剪開，用生理鹽水洗滌胃內容物，將胃固定於10％甲醛中，15min後將胃平展於玻璃表麵皿上，在放大鏡下用電子數顯卡尺精確量取潰瘍麵的長徑和短徑，並計算潰瘍麵積。
計算潰瘍抑製率［潰瘍抑製率＝（對照組潰瘍麵積－給藥組潰瘍麵積）／對照組潰瘍麵積］，觀察潰瘍愈合程度。
取上述實驗中製備的血清，嚴格按照試劑盒的說明，按硫代巴比妥酸法測定大鼠血清中丙二醛（MDA）及SOD的含量。
所有數據均以X±SD表示，采用SPSS11.0版本統計學軟件中的單因素方差分析處理數據，組間采用T檢驗方法進行檢驗，P＜0.05為有統計學意義。
3.野生和栽培品種對小鼠無水乙醇致胃潰瘍的預防作用
正常小鼠禁食24h後，胃黏膜淡紅色，表麵可見黏膜皺襞。溶媒對照組小鼠胃體部出現點狀、片狀褐色出血點，且有胃出血症狀，0.9%氯化鈉溶液衝洗後可見腺胃部黏膜深紅色，明顯充血、水腫及點、線狀糜爛，野生和栽培品種各劑量組均能明顯抑製潰瘍形成，且劑量和效應相關，其效果與硫糖鋁和西咪替丁相近，野生和栽培品種抑製小鼠無水乙醇致胃潰瘍效果相當。
（五）討論與結論
消化性潰瘍是人類的常見病，好發於男性，可發生在不同的年齡階段，其病因及發病機製至今還未完全闡明。目前認為，消化性潰瘍的發生是由於對胃、十二指腸黏膜有損害作用的侵襲因素（如胃酸，胃蛋白酶，幽門螺旋杆菌等）與黏膜自身防禦／修複因素（如前列腺素，胃黏膜血流等）之間失去平衡的結果。本文采用了小鼠無水乙醇致胃潰瘍模型和大鼠乙酸型胃潰瘍兩種實驗模型分別從預防和治療兩方麵考察白及栽培品提取物對實驗性胃潰瘍的作用。
無水乙醇所致胃潰瘍模型是一種急性胃潰瘍模型，其形成機理主要是酒精直接損傷胃黏膜，引起胃壁血液循環障礙、組織壞死脫落導致潰瘍形成。實驗結果顯示，白及野生品種和栽培品種均能夠顯著減少胃潰瘍及出血麵積，其效果明顯比硫糖鋁好，略優於西咪替丁。
醋酸型實驗性胃潰瘍模型是一種慢性胃潰瘍模型，用於觀察藥物對胃潰瘍的治療效果。其形成機理主要是醋酸直接損傷胃黏膜組織並直接引起局部血液循環障礙。實驗結果顯示，白及野生品種和栽培品種對醋酸型胃潰瘍療效顯著，能夠明顯促進潰瘍麵的愈合，減少胃穿孔的出現，並且減少了胃黏膜出血麵積，其效果略優於雷尼替丁。說明白及野生品種和栽培品種可能具有改善潰瘍灶局部血液循環，促進受損胃黏膜的愈合的作用，對慢性胃潰瘍具有較好的治療效果。
機體通過酶係統和非酶係統產生氧自由基，後者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸引發脂質過氧化作用，並由此形成脂質過氧化物（MDA），使組織細胞受損傷。因此MDA含量的多少又間接反映了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度。大鼠血清中MDA的含量測定表明，白及野生品種和栽培品種能夠顯著降低血清中的MDA含量，由此可見，白及野生品種和栽培品種可能通過抑製血清中的脂質過氧化反應，從而減輕胃黏膜的損傷程度，顯示抗胃潰瘍療效。
結論:白及野生品種和栽培品種對小鼠無水乙醇致胃潰瘍模型具有較好的預防作用，對大鼠醋酸型胃潰瘍模型具有較好的治療作用，並能夠減低血清中MDA的含量，提高SOD的活性。其抗胃潰瘍的機製可能是通過改善胃黏膜血液循環，抑製脂質過氧化反應，促進胃黏膜修複。
二、抑製上消化道出血的實驗研究
上消化道出血以上消化道潰瘍和急慢性胃炎等病為多見，表現為吐血、黑便或大便潛血黑便或大便潛血。其發病原因主要是應激反應、化學或物理等不良刺激引起血管痙攣，黏膜缺血，破壞胃粘液-黏膜屏障，並因胃酸侵蝕，胃蛋白酶的消化等作用，而導致血管破裂，黏膜破損。
采用消炎痛加乙醇致小鼠上消化道出血模型觀察白及野生品種和栽培品種對實驗性上消化道出血模型的影響；采用玻片法測定白及野生品種和栽培品種對小鼠凝血時間的影響，並測試本品對小鼠血小板計數影響；采用QUICK氏法測定白及野生品種和栽培品種對大鼠凝血酶原時間影響，並測定白及野生品種和栽培品種對大鼠血漿複鈣時間影響。
觀察白及野生品種和栽培品種對小鼠上消化道出血模型的藥理作用，篩選出療效較好的樣品，並對其機理進行初步的探討。
（一）實驗材料
1.藥品與試劑
白及野生品種和栽培品種由貴州益佰製藥有限公司提供；法莫替丁由湖南迪諾製藥有限公司生產（批號：H43030667）；阿斯匹林腸溶片由南京白敬宇製藥有限責任公司生產（批號：H32026500）；消炎痛由江蘇亞邦愛普森藥業有限公司生產（批號：H32021431）；生理鹽水由中國大塚製藥有限公司生產（批號：H12020010）；無水乙醇由國藥集團化學試劑有限公司生產（批號：20070206）；碳酸氫鈉由上海虹光化工廠生產（批號：050724）；甲醛溶液由國藥集團化學試劑有限公司生產（批號：20070225）；草酸鈉由北京化學試劑公司生產（批號：001205）；丙酮由昆山金城試劑有限公司生產（批號：20060720）；無水氯化鈣由江蘇湖橋化工廠鎮江醫藥站生產（批號：951215）。
2.儀器與設備
JA2003N型電子精密天平由上海精密科學儀器有限公司生產；DT2000電子天平由常熟市百靈天平儀器有限公司生產；XDS－1A型倒置顯微鏡由上海精密儀器儀表有限公司生產；TGL－16B台式離心機由上海安亭科學儀器廠生產；XB－K－25血細胞計數板由上海求精生化試劑儀器有限公司生產；KD－6128記時器由KADIO公司生產。
（二）實驗方法
1.對小鼠上消化道出血的影響
小鼠隨機分為12組，每組10隻，分為溶媒對照組，陽性對照組，白及野生品種和栽培品種組。實驗前，小鼠禁食24h，按0.1ml/lOg腹腔注射消炎痛。0.5h後，給藥組按0.2ml/lOg分別灌胃50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg白及野生品種和栽培品種的0.5%㎝C溶液。
3h後重複灌胃1次，第2次灌胃2.5h後，再按0.1ml/10g灌胃50%乙醇，1h後，脫頸椎處死小鼠，解剖取胃，在福爾馬林溶液中固定，觀察比較潰瘍指數。
按Guth標準計算潰瘍指數和潰瘍抑製率：按潰瘍糜爛麵或出血麵麵積大小給予計分：①每3個點狀潰瘍或出血點（黏膜缺損小於1mm或者出血性糜爛小點，稱為點狀潰瘍）計1分。②條狀出血：以遊標卡尺測量潰瘍或出血麵的最大長徑和垂直於最大長徑的最大寬徑，二者的乘積即為潰瘍指數。寬為1mm者每mm長為1分；2mm寬者每mm長為2分；3mm寬者每mm長為3分。
2.對小鼠凝血時間和血小板計數影響
小鼠40隻，雌雄各半，體重20±2g，適應性飼養1天後，隨機分為4組，每組10隻。即：溶劑對照組、白及野生品種和栽培品種組。溶劑對照組：每天按0.2ml/10g灌胃1次蒸餾水；白及野生品種和栽培品種分別灌胃50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg，上述實驗動物連續給藥5d。