2.酸性磷酸酶
酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）也是一種水解酶，在pH4.5～5.5範圍內催化有機磷酸單脂水解。其分布很廣，主要定位於溶酶體，為溶酶體的標誌酶。破骨細胞內酶性磷酸酶活性很強，巨噬細胞也顯強弱不同的酶活性。細胞蛻變過程酶性磷酸酶活性增強。此酶可被氟化鈉抑製。
鉛沉澱法顯示酸性磷酸酶（Waters and Butcher，1980）
反應原理：底物β-甘油磷酸鈉，在酸性pH被酶催化水解為甘油及磷酸，磷酸與鈣化合形成磷酸鈣沉澱於酶活性部位，但磷酸鈣不能顯色，故再用鉛鹽處理轉變為磷酸鉛，最後用硫化銨處理而產生硫化鉛沉澱，借其黑色顯示酶活性及定位。
染色步驟：
（1）組織處理：不經固定液的恒冷箱切片效果最好。也可用中性緩衝甲醛液於4℃固定12～18小時，作一般冷凍切片，然後將切片換水洗3～4次。
（2）切片入孵育液，37℃，30分鍾（可稍延長）。
孵育液的配製：硝酸鉛［Pb（NO3）2］132mg，0.2mol醋酸鹽-醋酸緩衝液（pH4.7）25ml。β-甘油磷酸鈉315mg，蒸餾水75ml。臨用前加熱至37℃。此液可在室溫保存數日。
（3）換水洗4次，每次1分鍾。
（4）入硫化銨液約半分鍾（30秒），然後換水洗3次。硫化銨水溶液在用前現配。
硫化銨溶液的配製：硫化銨（黃色）0.5ml，蒸餾水100ml。
（5）水洗後以水溶性透明膠封固。
結果：酶活性處呈黑色。
注：①切片如需經合成樹脂封固，也可在經硫化銨及水洗處理後，即用無水酒精（不用低濃度酒精開始上行脫水）急洗數次，再經無水酒精：二甲苯（1：1），最後經二甲苯透明，用人工合成樹脂封固；②對照片可不經過孵育液，其他各步依次進行，也可各步驟依次進行，惟在孵育液內加0.01mol的氯化鈉（sodium fluoride），也可抑製酶的活性。
重氮鹽偶聯法顯示酸性磷酸酶
反應原理：底物α-萘酚磷酸鈉在酸性pH被酶催化水解，所遊離出萘酚立即與重氮鹽堅牢石榴紅GBC（Fast Garnet GBC）等偶聯，生成有色的偶氮染料沉澱於酶活性部位，借其色顯示酶活性及定位。
染色步驟：
（1）組織塊冷凍切片（同上法）。如用石蠟切片可選擇下列固定劑：冷丙酮、甲醛甲醇液（即40%甲醛10ml，甲醇90ml）或甲醛-鈣液固定，4℃。
（2）切片脫蠟“下行”至水，冷凍切片直入蒸餾水。
（3）浸入下列孵育液37℃孵育1～4小時。
孵育液的配製：0.1～0.2mol醋酸鹽緩衝溶液（pH5.0～5.2）10ml，α-萘酚磷酸鈉10mg，堅牢石榴紅GBC-10mg。先將α-萘酚磷酸鈉溶於醋酸緩衝液，再加堅牢石榴紅GBC，攪拌，過濾後使用。
（4）蒸餾水速洗。
（5）2%甲基綠水溶液複染3～5分鍾。
（6）切片用濾紙吸幹。
（7）經95%酒精分色脫水30秒至60分鍾，純酒精30秒至60分鍾。
（8）二甲苯透明，中性樹膠封固，如冷凍切片則用甘油明膠封固或PVP封固。
結果：酸性磷酸酶呈紅色，細胞核呈綠色。
對照：用8.4mg氟化鈉溶於20ml蒸餾水，將切片在室溫處理1～2小時。
結果：酸性磷酸酶呈陰性。
3.三磷腺苷酶
三磷腺苷酶（ATP酶）（adenosine triphosphatase，ATPase）又稱三磷腺苷（adenosine triphos phate，ATP）磷酸水解酶、腺苷焦磷酸酶或腺苷三磷酶。ATPase能催化三磷腺苷（ATP）水解，生成二磷酸腺苷（ADP）和磷酸，並釋放能量。ATP酶主要有三種：①肌球蛋白ATP酶，見於肌原纖維，適宜pH為9，被Ca2+激活；②細胞膜ATP酶，見於細胞膜，適宜pH為7.5，須Mg2+存在，被Na+和K+激活，被Ca2+、烏巴因、根皮苷抑製；③線粒體ATP酶，見於線粒體。
鉛法顯示：鎂激活三磷腺苷酶（lead method for magnesium activated adenosinetriphosphatase-ATP ase，Wachstein meisel，1960）
反應原理：與鉛沉澱法顯示酸性磷酸酶的原理相同，但底物為ATP，pH為7.2。
染色步驟：
（1）組織處理：不固定或甲醛溶液-鈣固定（4℃）。未固定組織恒冷切片。
（2）切片可不固定，直接入37℃作用液10～60分鍾，也可以4℃甲醛溶液-鈣固定15～30分鍾，冷蒸餾水洗後，入作用液反應。
作用液的配製：三磷腺苷鈉鹽（adenosine triphosphate sodium salt）4mg，雙蒸水4ml（以0.1mol/L NaOH調pH至7.2），0.2mol/L Tris-馬來酸緩衝液（pH7.2）4ml，2%硝酸鉛0.6ml，2.5%MgSO4?7H2O 1ml。也可在此液內加二硝基苯酚（dinitrophenol，DNP）8mg。充分混合後預先加溫至37℃，如液體不澄清可過濾。
（3）蒸餾水洗2次，每次2分鍾。
（4）1%硫化銨2分鍾。
（5）未固定的組織用甲醛溶液-鈣固定15～20分鍾。
（6）自來水洗，甘油-明膠封固。