2.過氧化物酶
過氧化物酶（peroxidase）是一種氧化還原酶，見於乳腺、甲狀腺、涎腺和肥大細胞等。顯示過氧化物酶的方法以聯苯胺法為最好。但二氨基聯苯胺有毒性且不夠敏感，所以目前多采用四甲基聯苯胺（TMB）法。
四甲基聯苯胺（TMB）法顯示過氧化物酶
反應原理：過氧化物酶能與過氧化氫化反應形成初級複合物，本身被還原，同時產生遊離氧原子，後者使無色的聯苯胺最後形成有色的多聚體沉澱。
染色步驟：
（1）冷凍切片，蒸餾水洗。
（2）孵育液預見：21℃左右，20分鍾。宜避強光，不時晃動切片。孵育液的顏色應無明顯變化，否則，說明容器不幹淨。
孵育液的配製：甲液：亞硝基鐵氰化鈉（sodium nitroprusside）（硝普鈉）100mg，蒸餾水92.5ml，0.2mol/L醋酸緩衝液（pH3.3）5ml。乙液：3，3，5′，5′-四甲基聯苯胺（3，3，5′，5′-tetramethylbenzidine，TMB）5mg，無水酒精2.5ml。加熱至37～40℃以加速TMB的溶解。臨用前現配，即將2.5ml甲液加入97.5ml乙液中混勻，配好後2小時內使用。
（3）取出切片，暫置於0.2mol/L醋酸緩衝液內，以防幹涸。再於孵育液內每100ml中加入0.3%H2O2 1～5ml。充分攪勻。H2O2具體含量視切片而定，以求得到最多的反應產物和較少的非特異性反應。
（4）重新切片浸入，不時晃動，避強光，21℃左右，20分鍾。
（5）0.2mol/L醋酸緩衝液（pH3.3）浸洗，0～4℃，5分鍾，6次。可在此液中保存4小時，而無明顯褪色發生，但不宜超過4℃。
（6）鉻礬明膠載片黏片，空氣中幹燥。
（7）必須時中性紅複染顯示細胞核。
（8）脫水，透明。
（9）樹膠封固。
結果：反應產物呈藍或暗藍色。
說明：孵育液的亞硝基鐵氰化鈉起穩定藍色反應物作用，但在TMB反應中，若其用量大，較易出現非特異性針狀結晶或細顆粒狀沉澱，將甲液中的硝普鈉含量從100ml減至50ml可減少非特異性沉澱，但同時又降低了反應的靈敏度，故多傾向於用90mg。乙液中用酒精是為了溶解TMB，但它對反應的靈敏度和反應產物的保持有不利影響，因此，在脫水過程中經酒精的時間應盡可能短，並且切片宜在低溫下避光保存。
（三）脫氫酶
脫氫酶為含有輔酶Ⅰ或輔酶Ⅱ的酶類，目前能用組織化學方法顯示出酶定位的有：琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶、穀氨酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶和α-酮戊二酸脫氫酶。顯示各種脫氫酶係統的反應都毫不例外地需要四唑鹽的存在，同時都有各酶的特定底物。常用的四唑鹽為硝基四氮唑藍（nitro-BT）和3-（4，5二甲基-噻唑-2）-2，5二甲基溴化四唑。
脫氫酶的組化顯示，需要三要素：①組織內的脫氫酶（如琥珀酸脫氫酶）；②氫供體的酶作用物（如琥珀酸鈉）；③氫受體（如硝基四氮唑藍）。後者獲氫後被還原成不溶於水的有色甲替，就地原位沉積在有酶活性的部位（此時，琥珀酸被氧化成為延胡索酸）。
1.琥珀酸脫氫酶
琥珀酸脫氫酶是線粒體呼吸鏈的第一個酶，最後一個酶是細胞色素氧化酶。SDH是脫氫酶中最重要的酶。它存在於所有有氧呼吸的細胞內，和線粒體內膜緊密結合，它的活性反映三羧酸循環的情況，故為三羧酸循環的標誌酶，也為線粒體的標誌酶。
染色步驟：
（1）新鮮冷凍切片（貼於蓋玻片上）
（2）采用滴片法，即將切片置於濕平皿內加蓋連同孵育液一道置37℃預見熱30分鍾，再將孵育液滴於切片上孵育50～60分鍾。
孵育液的配製：0.1mol/L琥珀酸鈉 5ml，0.1mol/L PB（pH7.6）5ml，硝基四唑（NBT）10mg，二甲亞碸（DMSO）5ml。NBT先溶於DMSO中，然後加入到琥珀酸鈉和PB溶液中去。