四、製片
（一）磨骨
1.硝酸銀染色法
操作步驟：
（1）取幹枯或新鮮長骨骨幹，用細齒鋸或電動鋸將骨幹橫斷及縱斷鋸成薄片，不經脫鈣磨骨。手工磨骨時，先在手指與骨薄片間墊以橡皮或膠帶，開始用粗磨石加水磨骨。待將骨磨至半透明時，改用細磨石用液狀石蠟研磨至200μm後，充分流水衝洗，洗去殘渣。
（2）骨片浸入1%~2%硝酸銀水溶液，瓶底墊以紗布，放入37℃溫箱，鍍銀數日（也可在較高溫溫箱內處理）。
（3）水略洗，在還原液內12~24小時。
還原液配製：焦性沒食子酸1~1.5g，濃甲醛液8ml，蒸餾水100ml。
（4）流水衝冼後，可繼續在細磨石上磨至骨片約40~50μm。
（5）流水衝洗，經上行酒精脫水，二甲苯透明，封固。
結果：各型骨板呈黃色，哈氏管骨陷窩及骨小管呈黑色。各層相間骨板也可區分。
2.品紅染色法
操作步驟：
（1）骨標本用鋸鋸成約1mm厚的橫斷或縱斷麵骨片，放在粗磨石或砂紙上研磨，要磨得均勻，兩麵均磨到，磨到相當薄（約數百微米）後，用手指抵住或用軟木塞疊在上麵，在細磨石上用水研磨，至骨片呈斑白色時厚約100μm，透明無色時厚約30～40μm。一般至25～50μm即可。當骨片已很薄時，應小心從事，壓力勿過大，以免碎裂。
（2）研磨時不斷用低倍顯微鏡檢查，至骨小腔骨小管清楚時為止，且用自來水洗淨於室溫中幹燥，幹後放在載片上加蓋片，四周用漆封固，或用厚樹膠滴加在骨片上用蓋片封固。
（3）取新鮮骨組織鋸成1～2mm厚的薄片，不經固定直接入50％酒精品紅飽和液染2～3天，移入95％及100％酒精品紅
飽和液各染2～3天。
品紅飽和溶液的配法：50％酒精100ml，複紅7～8g；95％酒精100ml，複紅2g；100％酒精100ml，複紅1.5g。
從染液中取出骨片，放入二甲苯中，時間不限，久存無害。然後從二甲苯中取出在粗磨石上研磨，研磨時必須用二甲苯濕潤，不可幹燥。最後在細磨石上磨成30～50μm的薄片。用二甲苯多次洗滌後放在玻片上，加樹膠封固。
結果：骨小管及骨小腔呈紅紫色。
（二）硬組織恒冷箱切片
這種製片法在保存化學物質和酶活性方麵有很大優越性，這種切片對各種物質和酶的組織化學顯示都很適宜，方法是：取小塊骨，直接驟冷凍結後切片。在組織化學反應前，切片是否固定和脫鈣，取決於組織化學方法。
（三）不脫鈣骨切片機切片
骨經適當固定後，使用重型動力硬質切片機（Jung K2，K3）或自動控製硬質切片機（Polycut）均可。切片前要整修包埋塊。切片時要用40%乙醇濕潤組織切麵及刀麵，95%乙醇以展開鋪平切麵。要求連續切片，保留各種厚度的同一部位的切片。一般切製5~7μm切片為觀察細胞結構之用，切製15~20μm切片可供熒光下觀察測量四環素標記的數據。切片均需要十分平整，切片的質量以其貼片的平整度而定。可以顯示核酸、多糖和鈣等金屬。如小塊骨於適當固定液低溫固定後，以低溫甲基丙烯酸酯包埋劑於低溫浸透和包埋，所製切片可用以顯示一些水解酶和碳酸酐酶。
五、貼片
（1）載玻片準備：先將洗淨的載玻片浸於50℃的貼片液中浸數分鍾，然後在50℃溫箱中烘幹玻片，即可用於貼片。
貼片液配製：明膠4.5g，蒸餾水1000ml。在75℃溫度下溶解。取前液100ml加入4%硫酸鉀3.8ml，即為貼片液。
（2）貼片：處理過的載玻片上滴數滴95%乙醇，放上切片，用眼科鑷子小心展開，覆以一張薄紙，在用另一載玻片壓緊切片，用夾子夾緊放37℃恒溫箱中烘幹。