（3）ELISPOT測定法
用某種細胞因子的抗體包被固相載體，加人待檢細胞，經孵育後，如待檢細胞分泌了細胞因子，這些因子被包被的抗體捕獲。洗去細胞，加細胞因子特異性抗體。洗去未結合抗體。加酶標抗體，洗去未結合抗體。加底物顯色後，可出現有顏色的斑點。根據斑點的數量可判定細胞因子分泌細胞的數量，根據斑點的深淺，也可判定此細胞因子的相對含量。
4.化學發光物質標記技術
是用化學發光物質（如魯米諾)標記的抗原或抗體進行抗體或抗原檢測的方法。其結果用發光光度計來檢測。
5.免疫印跡試驗
將抗原物質用聚丙烯酰胺凝膠電泳分帶後轉至硝酸纖維素膜上，用酶標或放射性核素標記的抗體識別和結合抗原，加底物顯色或做放射自顯影顯示結果。該法能測定待檢蛋白質的分子量和特異性。應用該法檢測血清中的隻僅抗體是確認出乂感染的方法。
三、淋巴細胞的分離和檢測技術
1.外周血單個核細胞的分離
葡聚糖-泛影葡胺（又稱淋巴細胞分離液）密度梯度離心法是分離製備外周血單個核細胞的常用方法。將抗凝血疊加於分離液上，通過低速離心，即可將不同比重的細胞分層：紅細胞沉於管底；中性粒細胞密集布於紅細胞層與分離液之間；血小板懸浮於血漿中；PBMC則密集於血漿層與分離液界麵。PBMC含淋巴細胞和單核細胞。利用單核細胞粘附塑料的特性，可將其從PBMC中移去。
2.流式細胞法
流式細胞法是用熒光活化細胞分類儀對細胞進行分類的方法。用熒光素標記的抗體識別和結合待分離的細胞。根據細胞標記熒光素的有無和種類，采用可分離各種免疫細胞。采用FACS流式細胞法，也可利用細胞的表麵標誌對各種免疫細胞進行的鑒定。
3.磁珠分離法
磁珠分離法是利用免疫磁珠進行分離細胞的方法。免疫磁珠是特異性抗體與磁性微粒的交聯物。IMB可通過磁珠上的特異性抗體識別並結合表達相應膜抗原的細胞。應用磁場，可分離結合IMB的細胞。如采用抗CD3特異性抗體碰IMB可分離T淋巴細胞。
4.T細胞的功能測定技術
（1）淋巴細胞轉化試驗
在體外培養的條件下，T淋巴細胞受特異性抗原（如結核菌素）或非特異性有絲分裂原如植物血凝素的剌激後可發生增生，轉化為淋巴母細胞。以胸腺嘧啶參A試驗可測定淋巴細胞發生轉化的程度。細胞免疫功能低下的人，T淋巴細胞轉化率降低。刀豆蛋白DNA是小鼠T細胞的非特異性有絲分裂原。
（2）混合淋巴細胞培養
器官移植前應取受體與供體的淋巴細胞進行混合淋巴細胞培養試驗以挑選合適的供體。混合淋巴細胞培養分雙向法和單向法。
①雙向法：將兩個個體的淋巴細胞混合在一起培養，若二者的分子不同，兩個來源的淋巴細胞都會受到剌激而發生轉化。根據轉化的程度可判定兩個個體淋巴細胞隻仏分子的相異的程度。單卵雙生子間的淋巴細胞混合培養後不發生轉化。②單向法：將一個個體的淋巴細胞用絲裂黴素或放射處理使之失去自身的轉化能力，但保留著抗原性。用這種淋巴細胞和未經處理的另一個個體的淋巴細胞混合培養。根據未經處理的淋巴細胞的轉化程度來判定兩個個體淋巴細胞分子的相差的程度。
混合淋巴細胞培養實驗中，T淋巴細胞和B淋巴細胞均可發生轉化。
(3)遲發超敏反應皮試
將已知量的抗原（如結核菌純化蛋白衍生物）注射入前臂皮內，24~28小時後測定硬結大小，硬結直徑大於10mm即被視為陽性。皮試陰性的人，可能有細胞免疫功能低下也可能未接觸過相應的抗原。
5.B淋巴細胞功能的檢測
（1）B淋巴細胞轉化試驗
將A淋巴細胞和不溶性的金黃葡萄球菌一起培養，以H3-胸腺嘧啶參A試驗可測定發生B淋巴細胞發生轉化的程度。細菌脂多糖是小鼠的B細胞分裂原。
（2）抗體生成細胞的測定
常用溶血空斑試驗.在此實驗中，抗體生成細胞分泌的與綿羊紅細胞表麵的抗原鎮合，在補體參與下出現溶血反應。
四、細胞因子的檢測技術
1．生物活性檢測
多種細胞因子在件外試驗中可刺激其依賴株細胞增生，以H3-胸腺嘧啶核苷參入法做細胞增生試驗就可判定這些細胞因子的生物學活性。利用某些細胞因子的功能特點也可檢測其生物學活性。
2.ELISA檢測
采用法，用細胞因子的特異性抗體可對各種細胞因子進行定量測定。
3.DNA聚合酶鏈反應
采用反轉錄DNA聚合酶鏈反應的方法，即RTPCR方法可測定待檢細胞中細胞因子特異性mRNA的表達。該法易出現假陽性和假陰性的結果，為了克服此缺點，在實驗中必須設嚴格的對照。
第十三單元 免疫學防治
考試要點[考試大綱]
一、免疫預防
①疫苗的種類；②常見的用於人工被動免疫的製劑；③計劃免疫。
二、免疫治療
①以抗體為基礎的免疫治療；②以細胞因子及其拮抗劑為基礎的免疫治療；③以細胞為基礎的免疫治療；④以免疫增強劑為基礎的免疫治療；⑤以免疫抑製劑為基礎的免疫治療。
重點、難點、疑點解析
一、免疫預防
免疫預防是指通過人工免疫是A增強或獲得對某種病原體或細胞（如腫瘤細胞）特異性抵抗力的方法，它包括人工主動免疫和人工被動免疫。人工主動免疫是通過接種疫苗使機體產生特異性免疫力（如對某種病原體的免疫力）的方法。用於人工主動免疫的、含有具有抗原性物質的生物製品被稱為疫苗。人工被動免疫是給機體注射含特異性抗體的免疫血清等生物製品，以治療或預防感染性疾病或其他疾病的方法。