二、免疫標記技術

1.免疫熒光技術

免疫熒光技術是用熒光素標記的抗體或(抗原)分子檢測相對應的抗原或抗體分子的技

(1)直接熒光法

把熒光素標記的抗體與待檢標本(細胞懸液、細胞塗片或組織切片)相互作用,洗去未結合熒光標記抗體,在熒光顯微鏡下觀察,有熒光的部位為陽性。

(2)間接熒光法

將特異性抗體(一抗)和待檢標本(細胞懸液、細胞塗.片或組織切片)相互作用後,加人熒光素標記的一抗的抗體(二抗)顯示結果。

免疫熒光法在病原體的診斷、細胞表麵標誌的鑒定等方麵用途廣泛。流式細胞儀幻是用於分離、鑒定熒光素標記單克隆抗體識別細胞的儀器。

1.放射免疫分析

根據競爭結合原理,應用放射性核素標記的抗原與相應的抗體(抗原)結合,通過抗原抗體複合物的放射性活性判斷結果。

(1)液相法

將待檢標本(含抗原)與定量的放射性核素標記的已知抗原和定量的特異抗體混合,經一定時間的作用後,分別測定免疫複合物和遊離部分的放射性。根據用非標記抗原作成的標準曲線,可確定待檢樣品中相應抗原的含量。

(2)固定法

將吸附到固相載體表麵的抗原與待檢標本(含抗體)作用,然後加標記抗體。測定結合於固相載體的放射性,判定結果。

放射免疫分析法在激素、藥物、抗體、維生素的測定等方麵應用廣泛。

2.酶免疫分析

(1)免疫酶染色

酶標抗體和抗原(如組織切片上的抗原)發生特異性結合後,加人酶底物。底物在酶的催化下生成有色的物質。

(2)酶聯免疫吸附實驗

①間接法:將已知的抗原包被在固相載體的表麵,加入待檢標本(含特異性抗體廣再加入酶標記抗抗體(第二抗體)。加底物顯色,根據顏色的光密度判定標本中抗體的含量。

②夾心法:將已知的特異性抗體包被在固相載體表麵,加人待檢標本(含抗原),標本中的抗原和包被的抗體結合。衝洗後,加入該抗原的酶標抗體,加底物顯色。根據顏色的光密度判定標本中抗原的含量。

③測定法:用某種細胞因子的抗體包被固相載體,加入待檢細胞,經孵育後,如待檢細胞分泌了細胞因子,這些因子被包被的抗體捕獲。洗去細胞,加細胞因子特異性抗體。洗去未結合抗體。加酶標抗體,洗去未結合抗體。加底物顯色後,可出現有顏色的斑點。根據斑點的數量可判定細胞因子分泌細胞的數量,根據斑點的深淺,也可判定此細胞因子的相對含量。

3.化學發光物質標記技術

是用化學發光物質標記的抗原或抗體進行抗體或抗原檢測的方法。其結果用發光光度計來檢測。

4.免疫印跡試驗

將抗原物質用聚丙烯酰胺凝膠電泳分帶後轉至硝酸纖維素膜上,用酶標或放射性核素標記的抗體識別和結合抗原,加底物顯色或做放射自顯影顯示結果。該法能測定待檢蛋白質的分子量和特異性。應用該法檢測血清中的抗體是確認感染的方法。

三、淋巴細胞的分離和檢測技術

1.外周血單個核細胞的分離

葡聚糖—泛影葡胺(又稱淋巴細胞分離液)密度梯度離心法是分離製備外周血單個核細胞的常用方法。將抗凝血疊加於分離液上,通過低速離心,即可將不同比重的細胞分層:紅細胞沉於管底;中性粒細胞密集布於紅細胞層與分離液之間;血小板懸浮於血漿中;則密集於血漿層與分離液界麵。含淋巴細胞和單核細胞。利用單核細胞粘附塑料的特性,可將其從中移去。

四、細胞因子的檢測技術

1.生物活性檢測

多種細胞因子在體外試驗中可刺激其依賴株細胞增生,以胸腺嘧啶核苷參人法做細胞增生試驗就可判定這些細胞因子的生物學活性。利用某些細胞因子的功能特點也可檢測其生物學活性。