結果顯示,pH在1.2,5.0,6.0,6.8,7.0,7.6時,其lgPapp均大於零,可以預測在此pH條件下該化合物親脂性較強,當pH為6.8時其Papp為7.48,lgPapp=0.87,說明在此pH條件下有利於吸收。
2.4白頭翁皂苷D溶解度的測定
取過量白頭翁皂苷D於10 mL具塞試管中,分別加以下2組介質5 mL:①有機溶劑組,包括乙醇、甲醇、乙腈、丙酮、正丁醇、二氯甲烷;②緩衝溶液組,pH分別為1.2,2.0,4.0,5.8,6.8,7.6,於25 ℃空氣振蕩器中振搖,分別在不同時間點取樣,1萬 r·min-1離心15 min後,根據線性範圍采用甲醇對樣品進行適當稀釋,按上述色譜條件進樣10 μL,記錄峰麵積,計算白頭翁皂苷D在各介質中的含量,並計算其在不同介質中的平衡溶解度。
白頭翁皂苷D在不同pH緩衝溶液中隨著pH不斷升高,溶解度逐漸增加,當pH為7.6時,其平衡溶解度達到0.38 g·L-1;白頭翁皂苷D在不同介質中的平衡溶解度以甲醇為最大,達到255.89 g·L-1,在乙腈中最小僅為0.20 g·L-1。
3討論
根據白頭翁皂苷D的分子結構可知,白頭翁皂苷D在堿性條件下易形成鹽,會改變其溶解性,從而導致測定結果不準確,故選擇在不同消化道的生理 pH 條件下測定其表觀溶解度及油水分配係數。
油水分配係數測定的方法有搖瓶法、產生柱法以及高效液相色譜法[8-13]。由於產生柱法測定過程繁雜、平衡時間太長,反相高效液相色譜法需采用已知P值的同係物對照品來建立標準曲線,費用高,而經典的搖瓶法操作簡單、成本低[14],所以采用搖瓶法測定白頭翁皂苷D的油水分配係數。此外,因白頭翁皂苷D的分子結構中具有五環三萜類的母核使其具有較高的脂溶性,而分子中又含有1個由3個單糖組成的糖鏈和母核上連結的羧基又使其具有一定的水溶性,故在油水分配體係的選擇過程中,應選擇更接近生物相、極性和溶解性均較好的正辛醇為油相[15]。所以,本實驗選用正辛醇-水係統作為其最佳油水分配體係。
在測定白頭翁皂苷D的平衡溶解度過程中,本實驗主要根據不同時間點樣品濃度變化和試管壁上附著過量的白頭翁皂苷D為指標,確定白頭翁皂苷D是否達到平衡。由白頭翁皂苷D在不同介質中的平衡溶解度可知,白頭翁皂苷D溶解性較差,難以有效地被機體吸收,從而導致其生物利度較差。白頭翁皂苷D在不同緩衝鹽溶液中隨pH升高其溶解度不斷增加,這可能與其結構上含有羧基有關,白頭翁皂苷D在堿性條件下易形成鹽,並隨著堿鹽增加其溶解度升高,故可以考慮通過讓其形成鹽提高溶解度,從而提高生物利用度。
根據本實驗對白頭翁皂苷D平衡溶解度及油水分配係數的測定結果可知其水溶性較差,根據文獻,藥物lgPapp在-1~1時藥物吸收較好[16],該結果說明機體對白頭翁皂苷D的吸收性較好。按照BCS(biopharmaceutics classification system)分類可知,白頭翁皂苷D屬於低溶解度、高透過性的藥物,所以,研製白頭翁皂苷D口服製劑的關鍵在於增加藥物在體內的溶出度,進而有利於提高其生物利用度。
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