廣東紫珠中咖啡酰基苯乙醇苷類化合物
化學
作者：胡曉 李麗 楊義芳 黃春躍 黃光磊
[摘要]應用各種色譜技術對廣東紫珠中咖啡酰基苯乙醇苷類化合物進行分離純化，采用NMR和質譜等波譜學手段對單體化合物進行結構鑒定。從廣東紫珠地上部位的醇提物中共分離得到10個咖啡酰基苯乙醇苷類化合物，鑒定為2′-乙酰基毛蕊花糖苷（1），管花苷E（2），毛蕊花糖苷（3），管花苷 B（4），異毛蕊花糖苷（5），alyssonoside （6），2′-乙酰基連翹酯苷 B（7），江藤苷（8），連翹酯苷B（9），金石蠶苷（10）。化合物4是首次從馬鞭草科植物中分離得到，化合物6是首次從紫珠屬植物中分離得到，化合物1，2，5，7均為首次從該植物中分離得到。
[關鍵詞]馬鞭草科；廣東紫珠；咖啡酰基苯乙醇苷
廣東紫珠Callicarpa kwangtungensis Chun係馬鞭草科紫珠屬植物，又名止血柴、紫珠草、金刀菜等，分布於我國江西、廣東、貴州等地，並在江西萍鄉等地有廣泛栽培[1]。廣東紫珠以幹燥莖枝及葉入藥，新收錄於2010年版《中國藥典》，具有收斂止血、清熱解毒之功效，民間主要用於治療偏頭痛、吐血、跌打腫痛和外傷出血，臨床主要用於治療宮頸糜爛出血、陰道炎及宮頸炎等，是“抗宮炎片”和“抗宮炎膠囊”等中成藥的主要原料藥材。金石蠶苷和連翹酯苷B，作為2個比較常見的咖啡酰基苯乙醇苷類化合物，是廣東紫珠藥材質量控製的指標性成分，然而，對廣東紫珠中化學成分的報道多見黃酮類和三萜類化合物[2-4]，而咖啡酰基苯乙醇苷類化合物卻少有報道，直到最近，有學者通過LC-DAD-MS聯用技術從廣東紫珠提取物中鑒定出5個該類化合物[5]。作者對廣東紫珠地上部分的醇提物進行HPLC-DAD分析發現，一係列色譜峰表現出咖啡酰基苯乙醇苷類化合物的紫外光譜特征。因此，作者對廣東紫珠中主要的咖啡酰基苯乙醇苷類化合物進行分離純化鑒定，共得到10個苯乙醇苷類化合物，其中化合物4是首次從馬鞭草科植物中分離得到，化合物6是首次從紫珠屬植物中分離得到，化合物1，2，5，7為首次從該植物中分離得到。
1材料
DRX 400型核磁共振儀（德國Bruker公司）；ZQ2000型質譜儀（美國Waters公司）；中低壓柱色譜儀（日本YMC公司）；製備液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；Sephadex LH-20（美國GE Health Care）；半製備色譜柱Sepax Amethyst C18 column（10.0 mm×150 mm，5 μm；美國Sepax Technologies公司）；製備色譜柱 Ultimate XB-C18 column（21.2 mm×250 mm，5 μm；美國 Welch Materials公司），薄層色譜GF254矽膠預製板 （10～40 μm）和柱色譜矽膠 （200～300目）均為青島海洋化工有限公司生產；乙腈（HPLC級，江蘇漢邦有限公司），其他試劑均為分析純；金石蠶苷、連翹酯苷B對照品（上海源葉生物科技有限公司，20 mg/支，純度>98%）。
廣東紫珠采於2011年10月采自江西省萍鄉，經萍鄉市食品藥品監督檢驗所黃光磊主任藥劑師鑒定為馬鞭草科植物廣東紫珠C. kwangtungensis的幹燥地上部分，憑證保存於上海醫藥工業研究院中藥研究部。
2提取分離
廣東紫珠地上部位粗粉（5 kg）用10倍量的60%乙醇回流提取2次，每次2 h，合並提取液，過濾，濃縮至無醇味，上AB-8大孔吸附樹脂柱，15%乙醇除雜至洗出液近澄清，用40%乙醇洗脫，跟蹤色帶，至色帶全部洗脫下來，收集醇洗液，減壓濃縮得廣東紫珠幹浸膏150 g。幹浸膏經過矽膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（5∶1～4∶1～3∶1～2∶1～1∶1）梯度洗脫，得到6個組分A～F。
組分C經ODS中低壓快速分離色譜，以乙腈水（2∶8～3∶7）梯度洗脫，得到組分C1～C4。組分C3經半製備HPLC（23%乙腈，流速2 mL·min-1，檢測波長 332 nm）純化得到化合物7（40 mg，tR= 25.3 min）；組分C4經半製備HPLC（25%乙腈，流速2 mL·min-1，檢測波長 332 nm）純化得到化合物2（20 mg，tR=24.0 min），4（15 mg，tR=27.4 min）。組分D經ODS中低壓快速分離色譜，以乙腈水（2∶8～3∶7）梯度洗脫，得到組分D1～D3。D2經Sephadex LH-20凝膠柱色譜得到組分D2a～D2c，D2a經製備HPLC（23%乙腈，流速10 mL·min-1，檢測波長 332 nm）純化得到化合物6（60 mg，tR=20.2 min），1（40 mg，tR=24.8 min）；D2c經製備HPLC（21%乙腈，流速10 mL·min-1，檢測波長 332 nm）純化得到化合物3（55 mg，tR=19.7 min），5（20 mg，tR=23.2 min）；D3經製備HPLC（23%乙腈，流速10 mL·min-1，檢測波長 332 nm）純化得到化合物8（100 mg，tR=28.6 min）。組分E經ODS中低壓快速分離色譜，以乙腈水（1.8∶8.2～2.5∶7.5）梯度洗脫，得到組分E1～E3。組分E2經製備HPLC（20%乙腈，流速10 mL·min-1，檢測波長 332 nm）得到化合物9（200 mg，tR=20.2 min），10（300 mg，tR=24.5 min）。
3結構鑒定
化合物1白色無定形粉末。ESI-MS m/z 665 [M-H]-。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：7.59（1H，d，J=16.0 Hz，H-7），7.04（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），6.94（1H，dd，J=2.0，8.4 Hz，H-6），6.78（1H，d，J=8.4 Hz，H-5），6.67（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），6.64（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），6.52（1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6），6.26（1H，d，J=16.0 Hz，H-8），4.98（1H，t，J=9.2 Hz，H-4′），4.87（1H，t，J=8.4 Hz，H-2′），4.80（1H，d，J=1.6 Hz，H-1″），4.52（1H，d，J=8.0 Hz，H-1′），4.05（1H，m，H-8a），4.00（1H，t，J=9.2 Hz，H-3′），3.68～3.64（1H，m，H-8b），3.66～3.62（1H，m，H-6′a），3.63（1H，dd，J=1.6，3.2 Hz，H-2″），3.59～3.53（1H，m，H-5′），3.53～3.49（1H，m，H-6′b），3.59～3.53（1H，m，H-3″），3.53～3.49（1H，m，H-5″），3.25（1H，t，J=9.2 Hz，H-4″），2.69（2H，m，H-7），1.98（3H，s，2′-COCH3），1.07（3H，d，J=6.0 Hz，H-6″）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）。以上數據與文獻[6]基本一致，化合物1鑒定為2′-乙酰基毛蕊花糖苷（2′-acetylacteoside）。
化合物2白色無定形粉末。ESI-MS m/z 649 [M-H]-；1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：7.65（1H，d，J=16.0 Hz，H-7），7.44（2H，d，J=8.8 Hz，H-2，6），6.80（2H，d，J=8.8 Hz，H-3，5），6.67（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），6.64（1H，d，J=1.6 Hz，H-2），6.52（1H，dd，J=1.6，8.0 Hz，H-6），6.32（1H，d，J=16.0 Hz，H-8），4.99（1H，t，J=9.2 Hz，H-4′），4.87（1H，t，J=9.2 Hz，H-2′），4.80（1H，br s，H-1″），4.52（1H，d，J=8.0 Hz，H-1′），4.05（1H，m，H-8a）， 4.00（1H，t，J=9.2 Hz，H-3′），3.80（1H，m，H-6′a），3.68～3.60（1H，m，H-8b），3.64（1H，br s，H-2″）， 3.59～3.54（1H，m，H-5′），3.53～3.49（1H，m，H-6′b），3.53～3.49（1H，m，H-3″），3.53～3.49（1H，m，H-5″），3.25（1H，t，J=9.6 Hz，H-4″），2.69（2H，m，H-7），1.98（1H，s，2′-COCH3），1.06（3H，d，J=6.4 Hz，H-6″）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）。以上數據與文獻[7]基本一致，化合物2鑒定為管花苷E（tubuloside E）。