珠子參葉化學成分研究
化學
作者：何瑞 劉琦 劉銀環 柴江 趙東東 王薇 崔九成 宋小妹 嶽正剛
[摘要]研究珠子參葉的化學成分。采用矽膠，Sephadex LH-20，ODS柱色譜和半製備型高效液相色譜等方法進行分離純化，根據理化性質和波譜數據分析鑒定了7個化合物的結構5，7-二羥基-8-甲氧基黃酮（1）、人參皂苷Rs2（2）、西洋參皂苷Rl（3）、人參皂苷Rs1（4）、三七皂苷Fe（5）、人參皂苷Rd2（6） 和gypenosiden IX（7）。化合物1為首次從人參屬植物中分離得到，2～7均為首次從該植物中分離得到。
[關鍵詞]珠子參；化學成分；黃酮；皂苷
珠子參葉，亦稱漢中參葉，為五加科植物珠子參Panax japonicus C. A. Mey. var. major（Burk）C. Y. Wu et K. M. Feng的幹燥帶莖葉。其原植物珠子參主要分布在我國四川、雲南、陝西、湖北等省，又名扣子七、鈕子七、珠兒參，為秦巴山區特色中藥“太白七藥”中的一種。珠子參葉作為民間藥，具有清肺止咳、生津、潤喉、防暑、滋補強壯等功效。在民間多用其泡茶飲，用以保護嗓音[1]。自20世紀80年代起，作為人參屬的同屬植物，珠子參的根莖及其葉子被人們予以廣泛研究。經前人化學研究發現，珠子參葉中主要化學成分多為達瑪烷型三萜皂苷[2-5]，有著極高的開發和利用價值。鑒於秦巴山區有著豐富的珠子參葉資源，為了更合理的開發利用珠子參葉，作者對其化學成分進行了進一步研究，從其乙醇提取物中分離得到7個化合物，運用現代波譜技術和化學方法分析鑒定了它們的結構，分別是5，7-二羥基-8-甲氧基黃酮（1）、人參皂苷Rs2（2）、西洋參皂苷Rl（3）、人參皂苷Rs1（4）、三七皂苷Fe（5）、人參皂苷Rd2（6）和gypenosiden IX（7）。其中，化合物1為首次從人參屬植物中分離得到，2～7均為首次從該植物中分離得到。
1材料
XT5顯微熔點測定儀（溫度未校正，北京科儀電光儀器廠）；WFH-203三用紫外分析儀（上海精科實業有限公司）；Burker AVANCE 500型核磁共振波譜儀（瑞士Burker公司）；Quatrro質譜儀（Micromass公司）；LC3000 型高效液相色譜儀（北京創新通恒），YMC-Pack Pro C18半製備色譜柱（10 mm×250 mm，5 μm）；D-10l大孔吸附樹脂（天津南開大學化工廠）；柱色譜矽膠（100～200，200～300目）和薄層色譜用矽膠G（青島海浪矽膠幹燥劑廠）；ODS（日本YMC公司）、Sephadex LH-20柱（Pharmacia公司）；預製矽膠板HSGF254（煙台市芝罘黃務矽膠開發試驗廠）；RP-18高效薄層預製板（德國Merck公司）。本實驗所用試劑均為天津科密歐公司分析純和色譜醇產品。
藥材於2011年8月采於陝西眉縣太白山北坡，經陝西中醫學院生藥教研室王繼濤高級實驗師鑒定為珠子參P. japonicus var. major的葉，植物標本現保存於陝西中醫學院標本館，標本號ZZS201108。
2 提取與分離
珠子參幹燥葉5 kg，用8倍量70%乙醇回流提取3次，每次1.5 h。合並提取液，減壓濃縮得浸膏700 g。提取物以適量蒸餾水溶解，經D-101大孔吸附樹脂（2 kg）柱色譜吸附，依次用水，30%，70%，95%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫部分蒸幹得浸膏105 g。取其中80 g，采用矽膠柱色譜分離，以氯仿-甲醇-水（1∶0∶0～0∶1∶1）梯度洗脫， 經TLC檢測合並流分，共得到10個組分（A～J）。將組分A（3.12 g）進行矽膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯（1∶0～0∶1）梯度洗脫，得Fr.A-1～Fr.A-5。采用Sephadex LH-20凝膠色譜柱對Fr. A-3（1.17 g）分離純化，以氯仿-甲醇（1∶1）洗脫，得Fr.A-3-1～Fr.A-3-6。其中，Fr. A-3-3（235 mg）經HPLC製備（85%甲醇），得到化合物1（65 mg）。組分I（12.50 g）經矽膠柱色譜分離，以氯仿-甲醇-水（8∶2∶1～6.5∶3.5∶1）梯度洗脫得Fr. I-1～Fr.I-7。Fr. I-4（4.60 g）經ODS開放柱色譜（甲醇-水 40∶60～75∶25），得Fr. I-4-1～Fr. I-4-6。其中，Fr. I-4-5（560 mg）經HPLC製備（60%甲醇），得到化合物2（86 mg）。Fr. I-6（3.40 g）經ODS開放柱色譜（甲醇-水40∶60～85∶15），得Fr. I-6-1～Fr. I-6-7。其中，Fr. I-6-4（834 mg）經HPLC製備（60%甲醇），得到化合物3（12.5 mg）；Fr. I-6-6（658 mg）經HPLC製備（60%甲醇），得到化合物4（67 mg）。組分H（7.80 g）經矽膠柱色譜分離，以氯仿-甲醇-水（10∶1∶1～7∶3.5∶1）梯度洗脫得Fr. H-1～Fr. H-6。Fr. H-4（2.30 g）經ODS開放柱色譜（甲醇-水40∶60～85∶15），得Fr. H-4-1～Fr. H-4-5。其中，Fr. H-4-3（325 mg）經HPLC製備（68%甲醇），得到化合物5（25 mg）。其中，Fr. H-4-4（658 mg）經HPLC製備（65%甲醇），得到化合物6（67.3 mg）和化合物7（23.5 mg）。
3結構鑒定
化合物1黃色無定形粉末（甲醇），mp 203～205 ℃。鹽酸-鎂粉反應呈陽性，Molish反應呈陰性，10%硫酸-乙醇顯黃色。ESI-MS m/z 307[M+Na]+，283[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500 MHz）δ：3.9（3H，s，8-OCH3），6.3（1H，s，H-3），10.8（1H，br s，7-OH），12.5（1H，s，5-OH）； 13C-NMR（Pyr-d5，125 MHz）δ：163.0（C-2），105.1（C-3），182.0（C-4），156.2（C-5），99.1（C-6），157.4（C-7），127.8（C-8），149.6（C-9），103.8（C-10），130.8（C-1′），129.3（C-2′），126.3（C-3′），122.0（C-4′），126.3（C-5′），129.3（C-6′），61.1（8-OCH3）。以上數據與文獻[6]中數據一致，故鑒定5，7-二羥基-8-甲氧基黃酮。