2.4.2 精密度試驗 精密吸取2.3.2項下提取的川芎樣品溶液10 μL，連續進樣8次，測得上述5種藥效成分的峰麵積RSD均小於2%，表明儀器具有良好的精密度。
2.4.3 重複性試驗 取同一批川芎樣品6份，按2.3.2項下方法製備樣品溶液，吸取10 μL注入液相色譜儀，結果顯示上述5種藥效成分峰麵積的RSD分別為1.8%，0.90%，0.30%，0.44%，1.1%，表明超聲法提取重複性良好。
2.4.4 穩定性試驗 取同一樣品溶液，室溫放置，並分別於0，1，2，4，12，24，48 h進行測定，結果顯示上述5種藥效成分峰麵積RSD均小於1.6%，表明樣品溶液在48 h內穩定。
2.4.5 回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品0.5 g，共6份，精密稱定並加入阿魏酸0.46 mg、洋川芎內酯（I，H和A）和槁本內酯各0.5 mg，按2.3.2項下方法製備樣品，加樣回收率按如下公式計算：回收率（%）= （測得量-樣品中量） /加入量×100。 結果顯示上述5種藥效成分的平均加樣回收率，分別為103.1%，94.44%，96.61%，97.55%和95.22%。
2.5樣品測定
分別取不同采收期的川芎樣品，按2.3.2項下方法製備樣品溶液，按2.1項下色譜條件測定，利用已建立的標準曲線計算樣品中的阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和槁本內酯含量。
10次采收期樣品的平均阿魏酸質量分數為2.51 mg·g-1，在260 d時采收的樣品質量分數最高，為2.94 mg·g-1，比平均含量高17.1%，顯著高於除255 d之外的其他8個采收時期，與255 d采收的川芎阿魏酸含量差異在0.05水平時不顯著，在245，285，290 d采收的阿魏酸含量最低，分別比平均含量低21.8%，4.1%，12.1%，而最高含量比最低含量高出了42.7%。洋川芎內酯Ⅰ的平均質量分數為0.58 mg·g-1，270 d時采收的樣品質量分數最高，達0.70 mg·g-1，比平均含量高20.69%，顯著高於其他各采收期的含量，290 d 采收時的洋川芎內酯Ⅰ質量分數最低，僅0.44 mg·g-1，比270 d時采收的樣品含量低59.1%。245，260 d時采收的樣品洋川芎內酯H質量分數最高，分別為2.19，2.15 mg·g-1，在α=0.05水平時與其他各采收期的樣品含量差異顯著，除245 d采收的樣品外，隨著采收期推遲其含量呈先增加後降低的現象，290 d 采收時的洋川芎內酯H質量分數最低，僅1.25 mg·g-1，比260 d 采收的樣品含量低67.8%。洋川芎內酯A和槁本內酯的質量分數均在260 d采收時最高，分別為15.21，31.35 mg·g-1，與其他各采收期樣品的含量差異顯著，290 d 采收時其含量均最低，分別比最高含量低63.0%，35.0%。
隨著采收期的推遲，川芎藥材中5種主要藥效成分的含量呈先增加後減小的變化趨勢，其含量與采收期均呈二次或三次函數關係，並建立了相關的數學模型。通過上述5種藥效成分的含量與采收期的數學模型可知，早收和晚收均不利於提高川芎藥材的品質，255～270 d期間采收川芎藥材的阿魏酸、洋川芎內酯I和槁本內酯的含量最高，250～260 d期間采收川芎藥材的洋川芎內酯H和洋川芎內酯A的含量最高。綜合上述5種主要藥效成分含量和實際生產情況的角度來分析，260～265 d為最佳采收時期，此時川芎生長最旺盛，隨後開始逐漸衰老，藥效成分的含量慢慢降低。
3討論
3.1HPLC同時測定川芎5種藥效成分含量的方法
中藥材的質量評價正向快速、高效、樣品前處理簡單、高重複性、低成本、容易操作的方向發展。HPLC是中藥材及中藥飲片品質評價常用的方法，在川芎上常被用於構建指紋圖譜[5-6，13-16]來評價不同產地和不同品種的藥材的品質，但一般沒有具體藥效成分的含量；也有一些測定阿魏酸、川芎嗪、揮發油、香草醛、內酯類等單一成分或其中2～4種成分測定方法方麵的報道[4-12]，由於同時測定的成分少，測定的效率不高，至今鮮見同時測定阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和槁本內酯等多種成分方麵的研究。
同時對色譜溶劑（乙腈和甲醇）與不同濃度的乙酸和水組成的流動體係（甲醇-水、甲醇-乙酸、乙腈-水、乙腈-乙酸和甲醇-乙腈-乙酸等）、柱溫（25，30，35，40，45 ℃）和流速（0.7，0.8，0.9，1.0，1.1，1.2 mL·min-1）等單變量（因素）試驗，優化出了HPLC同時測定阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和槁本內酯含量，即選用流動相為0～5 min，乙腈-甲醇-1%冰醋酸（20∶40∶40），5～30 min，乙腈-甲醇-1%冰乙酸（60～100∶0∶40～0），流速l mL·min-1，檢測波長0～4.3 min，321 nm，4.31～30 min，275 nm，柱溫35 ℃，進樣體積10 μL。本文通過對測定方法的考察，建立了高重複性、快速的川芎藥材中主要藥效成分含量的測定方法且線性、精密度、重複性和回收率均良好，洗脫時間僅為30 min同時測定川芎藥材中5種重要的藥效成分，大大的提高了工作效率，同時也降低了測定成本，且所測定樣品的藥效成分含量與之前報道的結果一致[5，7-8，16，22-24]，所以本測定方法可以全麵應用於川芎藥材的品質評價。
3.2采收期對川芎5種藥效成分含量的影響
川芎的品質不僅因產地[10]、品種而異，也受耕作方式[25]、施肥技術[22-24]等生產技術的影響。蔣桂華[17]、饒凡[18]等研究認為采收期對川芎的品質也有較大影響，但前者研究的時期是5月20日及其前後10 d共3個時期，且結果在年度和地點不盡一致；而後者研究的時間從頭年12月至次年6月，時間間隔過大，對生產上主要采收時間（5月上旬至中旬）分析不夠。本文采用單因素隨機區組試驗方法，從4月15日（245 d）起每5天采收1次直至5月30日（290 d）止，共10個采收期，采用上述建立的方法，分析了都江堰產區（海拔600 m左右）每個采收期樣品的阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和槁本內酯共5種藥效成分的含量，並建立了其與采收期的回歸關係，發現采收期對這5種成分均有顯著影響，隨著采收期的推遲，5種藥效成分的含量均呈現先增後減的趨勢，采收過早過晚都會降低各藥效成分的含量，綜合考慮阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和槁本內酯的含量，確定最佳采收期為4月30日（260 d）至5月5日（265 d）。
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