2.3苦木供試品溶液的製備 取幹燥至恒重的苦木粉末約1.0 g，精密稱定，加95%乙醇50 mL，超聲提取2次，每次15 min，提取液過濾，濾液減壓回收溶劑，殘渣用甲醇溶解並定容至25 mL，搖勻，進樣前過0.45 μm微孔濾膜。
2.4線性關係考察 分別精密吸取混合對照品溶液0.1，1，5，10，15，20 μL，進樣測定，以峰麵積積分值（Y）對進樣質量（X）進行線性回歸，得回歸方程。
2.5精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液連續進樣5次，5個目標成分的峰麵積RSD（n=5）在0.7%～1.2%，表明儀器精密度良好。
2.6穩定性試驗 精密吸取苦木供試品溶液，分別於0，2，4，8，18，24 h依次進樣，5個成分峰麵積的RSD（n=8）在1.8%～2.8%，表明供試品在24 h內穩定。
2.7重複性試驗 取同一批次樣品6份，製備供試品溶液，測定5個化合物的含量，RSD（n=6） 在1.6%～2.3%，表明該方法重複性良好。
2.8加樣回收率 稱取已知含量的同一批樣品分別加入5個對照品適量，製備供試品溶液，進樣測定。
2.9樣品測定 取10批次苦木樣品，製備供試品溶液，進樣測定，每批樣品平行製備3份，每份進樣3次。
3討論
3.1色譜條件優選 比較了甲醇-水，乙腈-水，乙腈-0.1%冰醋酸，乙腈-0.1%三氯乙酸，乙腈-0.1%磷酸等溶劑係統，以乙腈-0.1%磷酸溶液進行梯度洗脫時，各待測成分的分離度好。
3.2供試品溶液製備方法的優選 以從苦木中分離得到的4個生物堿及1個黃酮成分含量為指標，比較了不同提取方法（超聲波萃取，熱回流，索式提取法），不同提取溶媒種類（95%，80%，70%，50%乙醇），不同提取溶媒用量（10，20，30，50，60，80倍量），提取時間（15，30，40，60 min），提取次數（1，2，3次），確定了2.3所述供試品製備方法。
3.3苦木藥材的質量評價 迄今為止，苦木藥材質量評價尚缺乏有效的方法，2010年版《中國藥典》苦木質量標準無專屬成分含量測定及限度，有學者采用HPLC測定苦木中鐵屎米-6-酮型生物堿的含量，但未見β-哢巴啉型及其他成分含量測定的報道。本文采用RP-HPLC同時測定10批苦木樣品中4個生物堿及1個二氫異黃酮的含量，結果5個指標成分的含量範圍分別為0.20～0.34 mg·g-1（1），0.26～0.45 mg·g-1（2），3.31～3.86 mg·g-1（3），0.18～0.52 mg·g-1（4）和2.64～3.98 mg·g-1（5）。 其中2個β-哢巴啉型生物堿的總量平均值為0.61 mg·g-1， 2個鐵屎米-6-酮型生物堿的總量平均值為3.98 mg·g-1。不同產地及采收時間的樣品含量差異較小，初步推斷該藥材質量較穩定，尚需大樣本樣品驗證。
根據本實驗樣品測定結果建議苦木藥材的質量控製標準中增加鐵屎米-6-酮型生物堿即苦木堿F的含量測定並製定其含量限度；增加β-哢巴啉型生物堿及二氫異黃酮即高麗槐素的鑒別項。
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