苦木成分分析及質量評價初步研究
化學
作者：吳衝 鄧貴華 林朝展 祝晨蔯
[摘要]建立RP-HPLC同時測定苦木中4個生物堿與1個黃酮成分含量的方法，並進行多批次藥材成分分析，為苦木質量評價提供依據。采用Kromasil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），流動相為乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脫，流速1.0 mL·min-1，檢測波長254 nm。4個生物堿苦木堿L，苦木堿B，苦木堿F，苦木堿D和黃酮高麗槐素的標準曲線及線性範圍依次為Y=6 525.6X+37.25（0.009～1.780 μg ， r=0.996 8），Y=3 662.3X+41.55（0.005～0.920 μg， r=0.999 5），Y=3 763.1X+146.87（0.015～3.060 μg， r=0.999 0），Y=2 174.1X+21.52（0.003～0.620 μg， r=0.999 5）， Y=276.25X+7.65（0.010～1.960 μg ， r=0.998 9），平均加樣回收率在98.02%～101.8%，RSD%在1.2%～2.8%，重複性及精密度良好。經過係統的方法學考察，該法簡便，準確，可用於苦木藥材的質量分析及控製。
[關鍵詞]苦木；β-哢巴啉類生物堿；鐵屎米-6-酮類生物堿；二氫異黃酮；RP-HPLC
苦木為我國南方地區常用中藥，為苦木科苦樹屬植物Picrasma quassioides（D. Don） Benn.的幹燥枝和葉，性寒，味苦，有清熱解毒，祛濕的功效，用於風熱感冒，咽喉腫痛，濕熱瀉痢，濕疹，瘡癤，蛇蟲咬傷[1]。化學成分研究表明，苦木中主要含有生物堿類，內酯類，黃酮類等化學成分[2-6]，其中生物堿類成分主要為鐵屎米-6-酮型及β-哢巴啉型。《中國藥典》2010年版（一部）收載苦木的質量標準為性狀鑒別，顯微鑒別及生物堿薄層色譜鑒別，無含量測定項。苦木及含苦木製劑的質量分析報道多為HPLC測定其中鐵屎米酮型生物堿的含量 [7-10]，而對β-哢巴啉型生物堿及黃酮類成分的質量控製尚鮮見報道。為有效控製苦木質量提供可靠的方法，本研究建立RP-HPLC同時測定苦木中2類生物堿（β-哢巴啉型生物堿，包括苦木堿L，苦木堿B；鐵屎米-6-酮型生物堿，包括苦木堿F，苦木堿D）及黃酮類（高麗槐素）含量，並進行多批次樣品中上述成分含量測定，以期為苦木藥材及其製劑的質量控製標準的再提高提供可資借鑒的基礎研究資料。
1材料
大連依利特P230高效液相色譜儀，配置紫外檢測器及EC2000色譜工作站（大連伊利特分析儀器有限公司）；AT-330色譜柱恒溫箱（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；Sartorius 電子天平（北京賽多利斯儀器係統有限公司）。液相用乙腈為色譜純（美國Honeywell），水為超純水，其他試劑均為國產分析純（汕頭市光華化學廠有限公司）。
苦木堿L（1-hydroxymethyl-β-carboline，1），苦木堿B（1-methoxicabony-β-carboline，2），苦木堿 F（4-methoxy-5-hydroxy-canthin-6-one，3 ），苦木堿D（4，5-dimethoxy-canthin-6-one，4），高麗槐素（maackiain，5）均為自製，經光譜學鑒定結構，色譜法檢測其純度均為98%以上。
苦木測試樣品共10批，經廣州中醫藥大學藥用植物學教研室潘超美教授鑒定為苦木科苦樹屬植物苦木P. quassioides的幹燥枝和葉，憑證標本現保存於廣州中醫藥大學臨床藥理研究所。
2方法與結果
2.1色譜條件及係統適應性 Kromasil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為乙腈（A）-0.1%磷酸（B），梯度洗脫（0～22 min，18%～25%A；22～30 min，25%～40% A；30～60 min，40%～45%A）；流速1.0 mL·min-1；檢測波長254 nm。對照品和樣品進樣量均為15 μL。理論塔板數苦木堿 L和B不低於8 000，苦木堿 F 和苦木堿 D不低於1萬，高麗槐素不低於5 000。
2.2對照品溶液的製備 精密稱取對照品1～5各適量，用甲醇充分溶解並定容，即得混合對照品儲備液，其中1～5的質量濃度分別為88.8，46.0，145.2，31.2，98.0 mg·L-1。