銀丹心腦通及主要成分配伍對心肌缺血再灌注損傷的保護作用
藥理
作者：王萬丹 王嵐 成龍 殷小傑 許海玉 王建露 梁日欣 楊洪軍
[摘要] 目的：研究銀丹心腦通及其主要成分配伍對心肌缺血再灌注損傷的保護性作用。方法：采用全心停灌再灌注的方法建立大鼠離體心髒缺血再灌注損傷模型。SD大鼠分為空白組（control），模型組（model），銀丹心腦通全方組（YDXNTC），銀杏提取物組（GBE），丹參醇提物組（SM-E），丹參水提物組（SM-H），混合物組（燈盞細辛，三七，山楂，絞股藍，大蒜，天然冰片；MC），銀杏+丹參醇提物配伍組，銀杏+丹參水提物配伍組，丹參醇提物+丹參水提物配伍組。離體心髒平衡後，空白組正常灌流70 min；模型組正常灌流10 min，停灌30 min，複灌30 min；給藥組以含有相應藥物的灌流液正常灌流10 min，餘同模型組。實驗過程中全程記錄心電圖，觀察室性心動過速/室顫（VT/VF）發生率，心髒停跳時間，複跳時間，正常律動時間及心率失常持續時間。複灌結束後，將心肌勻漿，測定SOD活力，MDA，LDH，CK-MB和心肌鈣蛋白I（cTnI）釋放量。結果：①銀丹心腦通全方組，丹參醇提物，丹參水提物，混合物能夠延長心髒停跳時間，縮短複跳時間、正常律動時間及心率失常持續時間，但對VT/VF發生的發生沒有明顯作用。銀杏提取物對減少複跳時間、正常律動時間及心率失常持續時間有較好作用，同時能夠改善VT/VF的發生。除銀杏+丹參水提配伍對心髒停跳時間無明顯影響以外，主要成分配伍對心髒停跳時間，複跳時間，正常律動時間及心率失常持續時間均有良好作用，且銀杏+丹參醇提對VT/VF發生也有明顯作用。②銀丹心腦通全方組，銀杏提取物，丹參醇提物，銀杏+丹參醇提物配伍組，丹參醇提物+丹參水提物配伍組能夠提高心肌SOD活力，降低MDA含量；丹參水提物，混合物，銀杏+丹參水提物配伍組僅使MDA含量降低。③銀丹心腦通全方組和丹參水提物減少了LDH的釋放。銀杏提取物，丹參醇提物，丹參水提物及銀杏+丹參醇提物配伍降低了CK-MB含量。④銀杏+丹參醇提物配伍抑製了cTnI的釋放。結論：銀丹心腦通、主要成分及主要成分配伍對心肌缺血再灌注損傷具有一定的保護作用，其作用機製可能與抗氧化，減輕鈣超載有關。
[關鍵詞]銀丹心腦通；主要成分配伍；心肌缺血再灌損傷；保護作用
冠心病是導致人類死亡的主要病因之一，再灌注是急性心肌梗死最有效的治療手段，但再灌注損傷是影響再灌注治療的重要因素[1]。心肌在經曆缺血後，當再恢複血液供應時，由於能量衰竭，氧自由基生成，鈣超載，炎症反應，細胞凋亡等因素，缺血心肌及周圍組織會受到進一步的損傷[1-2]。因此預防及減輕再灌注損傷已成為抗心肌梗死的熱點問題。
銀丹心腦通是由銀杏，丹參，燈盞細辛，三七，山楂，絞股藍，大蒜，天然冰片精製而成的天然苗藥製劑[3-4]。臨床上主要用於冠心病心絞痛，心律失常，心肌梗死等[3]。其相關研究主要集中在臨床應用及療效觀察方麵，有關藥效物質基礎的研究尚未報道。本實驗采用離體心髒灌流模擬缺血再灌注損傷研究了銀丹心腦通及主要成分配伍對心肌缺血再灌注損傷的保護作用，為探討其主要作用物質基礎奠定基礎。
1材料
1.1藥品與試劑
銀杏提取物（GBE），丹參醇提物（SM-E），丹參水提物（SM-H），混合物（燈盞細辛，三七，山楂，絞股藍，大蒜，天然冰片；MC），均由貴州百靈製藥股份有限公司提供。乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒（批號20130927）、丙二醛（MDA）試劑盒（批號20130911）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（批號20130912），均購自南京建成生物工程研究所。肌酸激酶同工酶（CK-MB）試劑盒（批號20131010）、心肌鈣蛋白I（cTnI）試劑盒（批號20131010），均購自上海藍基生物科技有限公司。
1.2動物
健康SD雄性大鼠，250～300 g，SPF級，購自北京大學醫學部實驗動物科學部，合格證號SCXK（京）2011-0012。
1.3儀器
Langendorff離體心髒灌流係統（西班牙PanLab公司）；FI55002蠕動泵（法國吉爾森公司）；MP150多導生理記錄係統（美國Bipac公司）；DFM-96γ放射免疫分析儀（合肥眾城電子係統有限責任公司）；MK3酶標儀（賽默飛世爾科技有限公司）。
2方法
2.1提取物製備[5]
2.1.1 銀杏提取物製備 銀杏葉粉碎，稀乙醇加熱回流提取，合並提取液，回收乙醇，濃縮物加至大孔吸附樹脂柱上，1次用水及不同濃度乙醇洗脫，收集相應洗脫液，回收乙醇，真空幹燥，粉碎成極細粉，總黃酮質量分數25.4%，K-H液配製，用於實驗。
2.1.2 丹參醇提物製備 乙醇回流提取2次，過濾，合並濾液，回收乙醇，濃縮，幹燥，粉碎成極細粉，丹參酮ⅡA質量分數5.31%，K-H液配製，用於實驗。
2.1.3 丹參水提物製備 2.1.2項的藥渣加水煎煮2次，過濾，合並濾液，濃縮成清膏，加乙醇使醇含量達70%，攪勻，靜置，回收乙醇，濃縮，幹燥，粉碎成極細粉，酚酸質量分數70.91%，K-H液配製，用於實驗。
2.1.4 混合物製備 燈盞細辛（野黃芩苷質量分數2.75%）、絞股藍（絞股藍總皂苷質量分數20.90%）、山楂（酚類質量分數9.49%）及三七（總皂苷質量分數5.49%）加水煎煮2次，過濾，合並濾液，濃縮，加乙醇使醇含量達70%，攪勻，靜置，取上清液，回收乙醇，濃縮，幹燥，粉碎成極細粉；大蒜提取大蒜油（大蒜素質量分數0.73%）；天然冰片研成極細粉（質量分數81.48%）；將各成分混合備用，K-H液配製，用於實驗。
2.1.5 配伍組製備 分別將上述銀杏提取物、丹參醇提物、丹參水提物的極細粉兩兩混合，K-H液配製，用於實驗。
2.2分組
SD大鼠分為空白組（control），模型組（model），銀丹心腦通全方組（YDXNTC），銀杏提取物組（GBE），丹參醇提物組（SM-E），丹參水提物組（SM-H），混合物組（燈盞細辛，三七，山楂，絞股藍，大蒜，天然冰片MC），銀杏+丹參醇提物配伍組（GSEC），銀杏+丹參水提物配伍組（GSHC），丹參醇提物+丹參水提物配伍組（SEHC），根據前期實驗結果確定給藥劑量，每組6隻。
2.3模型建立
SD大鼠用20%的烏拉坦麻醉，迅速摘取心髒置於Langendorff離體心髒灌流裝置，用Krebs-Henseleit 灌流液以恒定速度進行灌流（K-H液：NaCl 118 g， NaHCO3 24 g， CaCl2·2H2O 2.5 g， KCl 4.7 g， KH2PO4 1.2 g， MgSO4·7H2O 1.2 g， Glucose 11 mmol·L-1，pH 7.4）[6-7]。裝置內部保溫係統保持心髒溫度37 ℃，灌流液持續通以95%O2-5%CO2的混合氣體。連接MP100多導生理記錄係統，將2根電極分別插在心尖部（+）和主動脈根部（-），全程記錄離體心髒的心電圖。穩定15 min後，空白組正常灌流70 min；模型組正常灌流10 min，停灌30 min，複灌30 min；藥物處理組用含有藥液的K-H液正常灌流10 min， 其餘操作同模型組[6-8]。