A、花藥愈傷組織；B、愈傷組織分化出苗；C，D、生根形成完整植株；E、初期愈傷組織分化生根；F、部分愈傷組織分化生根。
北柴胡花藥愈傷組織及其分化形成的試管苗
Fig、1 Anther calli of Bupleurum chinense and plantlets differentiated from them
3、2 北柴胡花藥愈傷組織再分化
多次繼代後的愈傷轉移至20種分化培養基中，光照培養7 d左右愈傷開始變綠，14 d左右可見到芽生成。培養21 d後，在B1，A2，B2，D1，B3培養基中分化率較高，分別為48%，23%，18%，18%，15%；培養49 d後，在B1，A2，B2，B3，E1培養基中分化率較高，分別為60%，58%，49%，46%，35%。其中，在D2培養基中分化最快，10 d左右即可觀察到愈傷分化出苗。隨著培養時間的延長，不同培養基中愈傷分化率均有所提高。此外，在D3，D4，D5，D7，E2，E3和E4培養基中愈傷出現不同程度的褐化；在C2，D4，D5，D6，D7，E2，E3和E4培養基中愈傷增殖較明顯，分化率均低於20%；在A1，A2，A3和B1中同時也可觀察到愈傷組織分化出根。培養21 d和49 d愈傷分化出苗的統計結果（表2），愈傷數為實際參與統計的有效愈傷塊數。
3、2、1 ZT對北柴胡花藥愈傷組織再分化的影響 A1，A2，A3 3種培養基的培養結果顯示，隨著ZT濃度增加，愈傷分化出苗率先增加再降低，ZT 1、0 mg·L-1時分化率最高。培養時間的延長，分化率均有大幅度提高。在A1，A2，A3 3種培養基中均有愈傷
分化出根，且隨著ZT濃度增加，生根率降低。培養時間的延長，生根率提高。
3、2、2 KT對北柴胡花藥愈傷組織再分化的影響分析B1，B2，B3 3種培養基的培養結果，隨著KT濃度增加，愈傷分化出苗率降低， KT 0、5 mg·L-1時分化率最高。隨著培養時間的延長，分化率提高。在B1，B2，B3 3種培養基中均有愈傷分化出根，且隨著KT濃度增加，分化出根率降低。培養時間的延長，分化出根率提高。
3、2、3 6-BA，NAA對北柴胡花藥愈傷組織再分化的影響對C1，C2以及D1，D2，D3，D4，D5培養基的培養結果分析表明，6-BA與NAA適當組合可顯著提高愈傷分化出苗率。6-BA在0、2～1、5 mg·L-1，隨著激素濃度的增加，北柴胡花藥愈傷分化率降低。且6-BA大於或等於1、0 mg·L-1時，愈傷組織出現褐化現象。D3，D4培養結果顯示NAA濃度增加，分化率降低；D1，D2結果表明，低濃度範圍內，NAA濃度增加，分化率提高，且低濃度NAA時愈傷開始分化時間提前。該實驗中6-BA與NAA最佳組合為6-BA 1、0 mg·L-1+ NAA 0、1 mg·L-1。
3、3 小苗生根
在分化培養基D2中，愈傷培養49 d後所得的再生芽約1%有自身生根現象。將分化培養基中未生根的分化苗置於3種生根培養基中，其中①號和②號培養基中生根率均為100%，③號培養基中幼苗不生根。在①號和②號生根培養基中培養3～5 d後，小苗開始生根，從再生芽莖基部發出2～3條淡黃色幼根，15 d左右小苗根長達2～3 cm，獲得完整植株。
4 結論
本實驗建立了北柴胡花藥愈傷組織高效穩定再生體係，為下一步遺傳轉化體係的建立奠定了基礎。影響愈傷組織分化出苗率的主要因素是愈傷組織的狀態，生長旺盛，顆粒型好的愈傷組織較容易分化。本實驗得到適宜的花藥愈傷繼代培養基MS+2，4-D 1、0 mg·L-1+6-BA 0、1 mg·L-1+穀氨酰胺0、4 g·L-1+水解酪蛋白0、2 g·L-1+甘露醇3 g·L-1+麥芽糖30 g·L-1 +植物凝膠5 g·L-1；篩選出具有高分化率的北柴胡花藥愈傷分化培養基B1：MS+KT 0、5 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+植物凝膠5 g·L-1，其次為A2培養基MS+ZT 1、0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1 +植物凝膠5 g·L-1；分化出的幼苗可置於MS+蔗糖30 g·L-1 +植物凝膠5 g·L-1或1/2 MS+ NAA 0、5 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1 +植物凝膠5 g·L-1培養基中生根。在本實驗中觀察到，北柴胡花藥愈傷組織繼代次數少時，愈傷組織分化生根。此外，將已繼代約60周的花藥愈傷組織置於B1分化培養基中培養21 d後，其分化出苗率仍不低於45%。
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