3、1、3 pH的影響由於藥根堿含有酚羥基，所以當流動相未加入酸時，藥根堿的色譜峰有拖尾現象。加入磷酸，調節KH2PO4溶液的pH至3、0時，藥根堿與非洲防己堿的色譜峰峰形可明顯改善。
3、2 非洲防己堿色譜峰的歸屬
非洲防己堿早在20世紀60年代就曾從黃連中分離得到單體[23]，但未檢索到關於非洲防己堿含量測定的報道，也未檢索到關於在HPLC圖譜中對非洲防己堿色譜峰歸屬的報道，因此有學者認為非洲防己堿是在提取分離過程中生成的化合物。本文在考察HPLC色譜條件時發現，在藥根堿色譜峰的前麵有一個與其峰麵積相當的未知色譜峰（tR=27、5 min），又未檢索到與此色譜峰相關的文獻報道。因此，就此點本文對黃連藥材進行化學成分的提取分離及鑒定，得到了高純度的非洲防己堿，達到非洲防己堿對照品的要求，並在HPLC指紋圖譜中對其色譜峰進行了歸屬和含量測定。經測定非洲防己堿在黃連藥材中含量在0、60%～0、87%。另外，本文所測定的藥根堿在0、52%～0、74%，測定結果比以往文獻[22，24]所報道的藥根堿含量的1/2左右，從圖5A與B的比較中明顯可見A法測定的藥根堿的含量實際為藥根堿與非洲防己堿的總和。因此本文所采用的方法更準確地測定了黃連藥材中藥根堿與非洲防己堿的含量，澄清了非洲防己堿是在提取分離過程中生成的化合物這一觀點。
4 結論
本文選取了四川峨眉山地區具有代表性的10個黃連的主要產區的黃連藥材樣品，采用HPLC進行測定，以生物堿類成分為評價指標，建立了黃連的指紋圖譜，其分離度和重複性良好。通過比較確立了10個共有峰；采用與對照品比較的方法，確定了其中8個峰的歸屬，分別為小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿、藥根堿、非洲防己堿、groenlandicine和木蘭花堿。通過對黃連指紋圖譜的研究，10批次黃連根莖樣品的共有峰占總峰麵積均大於98%，整體相似度均大於0、99，在峨眉地區這一生長環境、氣候條件適合黃連的生長，其生物堿類成分的種類及相對含量一致。本圖譜的應用範圍擴大到全國各黃連主要產區，整體相似度均在0、99以上，表明同種黃連由於相同的遺傳背景決定了其生物堿的種類。但是，相對含量上存在一定差異，表明生長環境對生物堿的積累具有一定的影響。
作者收集的道地產區峨眉山市不同鄉鎮產10批次黃連采用本方法進行分析，小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿的含量高於藥典對其含量的規定，說明峨眉地區產黃連為優質藥材。
本實驗建立了黃連指紋圖譜研究方法，實驗方法簡便、快捷、重複性好，能夠較好地反映黃連藥材中化學成分的特征，為深入研究黃連活性成分的積累及變化規律，全麵評價黃連藥材和含黃連製劑的質量提供了一種有效手段。
[參考文獻]
[1] 徐國鈞，徐珞珊.常用中藥材品種整理和質量研究[M].福州：福建科學技術出版社，1992：505.
[2] 國家中醫藥管理局中華本草編委會.中華本草[M].上海：上海科學技術出版社，1999，7：213.
[3] Park K D，Lee J H，Kim S H，et al.Synthesis of 13-（substituted benzyl） berberine and berberrubine derivatives as antifungal agents[J].Bio org Med Chem Lett，2006，16：3913.
[4] 耿誌鵬，鄭海傑，張藝，等、RP-HPLC測定不同產地黃連中6種生物堿的含量[J]、中國中藥雜誌，2010，35（19）：2576.
[5] Yang Y，Ye X L，Li X G.Synthesis and antimicrobial activity of 8-alkylberberine derivatives with a long aliphatic chain[J].Planta Med，2007，73：602.
[6] Pereia G C，Branco A F，Matos J A，et al.Mito-chondrially targeted effects of berberine on. K1735-M2 mouse melanoma cells comparison with direct effects on isolated mitochondrial fractions[J].J Pharmacol Exp Ther，2007，323：636.
[7] Qin Y，Pang J Y，Chen W H.Inhibition of DNA topoisomerase I by nature and synthetic mono and dimeric protoberberine alkaloids[J].Chem Biodivers，2007，4：481.
[8] Zhang W J，Ou T M，Lu Y J.9-substituted berberine derivatives as G-quadruplex stabilizing ligands in telomeric DNA[J].Bioorg Med Chem，2007，15：5493.
[9] Zhou L，Yang Y，Wang X.Berberine stimulates glucose transport through a mechanism distinct from insulin[J].Metabolism，2007，56：405.
[10] 吳柯，楊俊霞，周岐新、小檗堿對實驗性大鼠結腸癌的防治作用與環氧化酶2關係的研究[J]、中國中藥雜誌，2010，35（20）：2768、
[11] 劉聖，餘娜，張小力，等、小檗堿對早期糖尿病腎病大鼠腎組織TGF-β1/SnoN表達失衡及其Smad信號通路的調控作用[J]、中國中藥雜誌，2012，37（23）：3604、
[12] Bustanji Y，Taha M O，Yousef A M，et al.Berberine potently inhibits protein tyrosine phosphatase lB：investigation by docking simulation and experimental validation[J].J Enzyme Inhib Med Chem，2006，2l：163.
[13] Bian X，He L，Yang G.Synthesis and antihyperlycemic evaluation of various protoberberine derivatives [J].Bioorg Med Chem Lett，2006，16：1380.
[14] Liang K W，Ting C T，Yin S C.Berberin suppresses MEK/ERK-dependent Egr-1 signaling pathway and inhibits vascular smooth muscle cell regrowth after in vitro mechanical injury[J]. Biochem Pharmacol，2006，71：806.
[15] Lee S，Lim H J，Park J H，et al.Berberine-induced LDLR up-regulation involves JNK pathway[J].Biochem Biophys Res Commun，2007，362：853.