館相關標本,確定西藏產川布的2種基原植物大戟科大戟屬的高山大戟E、 stracheyi與大果大戟E、 wallichii。結合前期的基礎工作,在甘肅藏區所使用的川布,基原植物為甘肅大戟E、 kansuensis [3]。
2、2 序列的獲得應用PCR產物直接測序的方法,獲得高山大戟E、 stracheyi與大果大戟E、 wallichii的完整序列(ITS1-5、8S-ITS2)。兩者序列的總長度均為646 bp:其中ITS1區為261 bp,ITS2區為221 bp,5、8S編碼區為164 bp。高山大戟E、 stracheyi的ITS 1區序列在72號位具有1雜合位點(C/G)。
2、3 序列種間分辨率的評價應用ClustalW軟件對高山大戟E、 stracheyi,大果大戟E、 wallichii,甘肅大戟E、 kansuensis以及外類群大戟E、 pekinensis,續隨子E、 lathyris,地錦草E、 humifusa的序列進行對位排列,MEGA 3、1分析軟件計算序列變異值。結果顯示,任意2種植物的序列成對比較時,均出現變異情況,遺傳距離變異幅度為:0、024(高山大戟E、 stracheyi與大果大戟E、 wallichii)~0、278(大戟E、 pekinensis與地錦草E、 humifusa)(表2)。由此構建的UPGMA係統發育樹顯示,各物種的親緣關係與經典分類學觀點相一致。即,高山大戟E、 stracheyi,大果大戟E、 wallichii與甘肅大戟E、 kansuensis聚為1支,它們均屬於大戟屬乳漿大戟亞屬Subg、 Esula下的歐亞大戟組Sect、 Tithymalus。
3 討論
大戟屬植物的鑒定,其杯狀聚傘花序具有重要的分類學意義,在標本采集時,應盡量采集完整的花序標本以利分類位置的確定。
序列分析顯示,上述6種植物中,任意2種的序列成對比較時,均出現變異情況,位點變異值最小為16個堿基對(高山大戟E、 stracheyi與大果大戟E、 wallichii),最大為150個堿基對(大戟E、 pekinensis與地錦草E、 humifusa)。一般認為,被子植物的nrDNA ITS1區與ITS2區中間的5、8S編碼區序列高度保守[10],但在上述6種植物的相關序列分析中,5、8S編碼區出現8個變異位點。因此,nrDNA ITS區序列不僅在大戟屬的係統分類學研究中具有重要意義,而且在藏藥川布及來源於大戟屬的中藥品種的鑒定中具有很好的種間分辨率,可用於川布及其相關品種的分子鑒定。同時,以該片段為基礎構建藏藥川布的DNA條形碼是適宜的。
藏藥基原植物來源呈現多樣性,如西藏廣為分
基於ITS序列構建的UPGMA係統發育樹
Fig、1 UPGMA systematic tree based on ITS sequences of Tibetan herb Chuan-Bu and its related species
布的高山大戟E、 stracheyi,大果大戟E、 wallichii,是西藏產川布的植物來源,而甘肅等地分布的甘肅大戟E、 kansuensis(西藏無分布)為甘肅藏區川布的基原植物。從構建的6種植物的UPGMA係統發育樹來看,此3種川布基原植物的親緣關係更為密切,均屬於大戟屬乳漿大戟亞屬Subg、 Esula下的歐亞大戟組Sect、 Tithymalus,並被聚為一支;藏藥品種整理有許多深入的工作要做。
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