2.3.5 穩定性試驗 精密吸取供試品溶液1 mL，置15 mL具塞試管中，分別在0，5，10，15，20 min按2.3.3項下自“精密加入新鮮配製的含5%香草醛冰醋酸溶液與高氯酸（2∶8）的混合液2 mL”起操作，測定吸光度，RSD 2.1%，說明供試品在20 min內顯色穩定。
2.3.6 重複性試驗 精密量取同一份樣品5份，每份1 mL，按2.3.3項下自“精密加入新鮮配製的含5%香草醛冰醋酸溶液與高氯酸（2∶8）的混合液2 mL”起操作，在同一條件下分別測定吸光度，RSD 2.6%，表明重複性良好。
2.3.7 加樣回收試驗 精密稱取空白脂質體凍幹粉10 mg，精密稱量，置10 mL量瓶中，分別精密加入2.5 g·L-1的絞股藍皂苷對照品溶液1.0，3.0，5.0 mL，加水稀釋至刻度。精密吸取2.0 mL置於離心管中，加0.5 mL魚精蛋白（10 g·L-1），靜置3 min，加入生理鹽水3.0 mL，在室溫條件下3 000 r·min-1離心30 min。精密量取上清液1.0 mL，按2.3.3項下自“精密加入新鮮配製的含5%香草醛冰醋酸溶液與高氯酸（2∶8）的混合液2 mL”起操作，在同一條件下分別測定吸光度，回收率為97.15%，RSD 2.1%。
2.3.8 絞股藍總皂苷脂質體包封率的測定 吸取脂質體2.0 mL於10 mL錐形離心管中，添加魚精蛋白（10 g·L-1）0.5 mL，攪勻，靜置3 min，加入生理鹽水3.0 mL，在室溫條件下3 000 r·min-1離心30 min。取上清液1 mL，測定其皂苷量，即遊離藥物量（W遊）。沉澱以10%曲拉通-X100（Triton-X100）3.0 mL溶解，並補充生理鹽水至5.0 mL。取溶液1 mL，測定其皂苷量，即包封藥物量（W包）。包封率= W包/（ W包+ W遊）×100%。該新型長循環脂質體的包封率為74.3%。
2.4 脂質體粒度分布及Zeta電位測定
采用動態光散射粒徑儀檢測平均粒徑和Zeta 電位。激光束波長633 nm，入射與散射光束夾角173°，溫度25 ℃。取脂質體溶液100 μL用水稀釋至10 mL，搖勻平衡3 min後測定。絞股藍總皂苷脂質體平均粒徑為288.1 nm，多分散係數（PDI）為0.218，說明該脂質體粒徑分布較均一。平均電位為-20.25 mV，表明該脂質體穩定性較好。
3 討論
采用PEG對β-穀甾醇進行修飾，修飾後的PEG-Sito作為穩定劑而加入到脂質體中，一方麵β-穀甾醇不引發心血管疾病，親脂性的β-穀甾醇還可以起到穩定脂質體膜的作用。同時柔性分子PEG的存在還能阻止吞噬細胞對脂質體的的識別和攝取，大大延長脂質體的血循環時間。本課題探討了用PEG修飾後的β-穀甾醇製備長循環脂質體的可行性。研究表明PEG修飾後的β-穀甾醇能與鞘磷脂形成脂質體。該新型脂質體改變了長循環脂質體對PEG修飾的磷脂材料的依賴，大幅降低了製備長循環脂質體的成本，是本文的獨特之處。
甾醇在乙醇中微溶，是製約乙醇注入法在脂質體工業化領域中應用的瓶頸之一。本課題在對β-穀甾醇進行修飾時，由於親水性材料PEG的引入，大大改善了β-穀甾醇在乙醇中的溶解度，工業上大規模采用乙醇注入法製備該長循環脂質體成為可能，也是本文的創新之處。
對比課題組以前對絞股藍總皂苷脂質體的研究結果，該新型長循環脂質體的包封率較普通脂質體的包封率由（79.1±3.4）%變為（74.3±2.6）%，方差分析結果表明包封率無顯著性差異，提示該長循環脂質體的內部結構與普通脂質體無異[13]。粒徑則由普通脂質體的202.6 nm，增大為288.1 nm，這可能是由於PEG分子鏈在水中柔性舒展開來造成的粒徑增大的緣故[14]。一般情況下，小於400 nm的納米粒子在血液中具有被動靶向到肝、脾或腫瘤組織的性質[15]，本課題組製備出的絞股藍皂苷長循環脂質體粒徑不到300 nm，因此該製劑具有被動靶向到肝和腫瘤的特性，可用於肝炎、脂肪肝和肝癌疾病的治療。
研究表明Zeta電位能從一定程度上反映納米分散體係的穩定性，Zeta 電位絕對值越高（>15 mV），粒子間的靜電斥力越大，有高的穩定性[16-18]。該絞股藍總皂苷長循環脂質體Zeta電位為-20.25 mV（電位絕對值>15 mV），而普通脂質體Zeta電位為-28.66 mV，表明長循環脂質體與普通脂質體一樣具有較好的穩定性，但長循環脂質體的Zeta電位絕對值下降了8.41 mV，這可能是由於脂質體外層的PEG的電荷屏障效應造成的[19]。
AFM電子顯微鏡常用於各種脂質體的形貌研究[20]。本課題應用AFM對該新型絞股藍總皂苷長循環脂質體進行了形貌觀察，電鏡下的長循環脂質體外形圓整、粒徑均一，證明用PEG修飾後的β-穀甾醇製備長循環脂質體是切實可行的。
本課題研究了用PEG修飾β-穀甾醇的方法，探討了用PEG-Sito與鞘磷脂製備絞股藍皂苷長循環脂質體的可行性，並對該新型脂質體進行了表征。該長循環脂質體不僅不含膽固醇，而且針對小分子β-穀甾醇進行PEG修飾[21]，合成中未采用價格昂貴的大分子磷脂為原料，分離純化過程大大減化，大幅降低了長循環脂質體的材料成本，具有很好的市場前景。關於該甾醇修飾的長循環脂質體更深層次的研究，如該新型長循環脂質體在體內有無加速血液清除現象（accelerated blood clearance， ABC） [22]、與普通磷脂修飾的長循環脂質體在體內各組織的分布與滯留特性等問題，正處於進一步研究中。
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