茯苓的化學成分研究
化學
作者：楊鵬飛 劉超 王洪慶 李家春 王振中 蕭偉 陳若芸
[摘要] 對中藥茯苓的化學成分進行了研究。利用正相和反相矽膠柱，Sephadex LH-20和製備型HPLC等色譜技術從中分離得到13個化合物，分別鑒定為土莫酸（1）、去氫土莫酸（2）、3β，5α-二羥基麥角甾-7，22-二烯-6-酮（3）、3β，5α，9α-三羥基麥角甾-7，22-二烯-6-酮（4）、麥角甾-7，22-二烯-3-酮（5）、6，9-環氧麥角甾-7，22-二烯-3β-醇（6）、麥角甾-4，22-二烯-3-酮（7）、麥角甾-7，22-二烯-3β，5α，6β-三醇（8）、麥角甾-7，22-二烯-5，6-環氧-3-醇（9）、β-穀甾醇（10）、核糖醇（11）、甘露醇（12）、齊墩果酸乙酸酯（13）。並運用質譜、核磁等波譜技術對分離得到的化合物進行了結構鑒定。化合物3～13為首次從該種中藥中分離得到。
[關鍵詞] 茯苓；化學成分；甾醇
茯苓為擔子菌門Basidiomycota，傘菌綱Agaricomycetes，多孔菌科Polyporaceae真菌茯苓Poria cocos（Schw.） Wolf的幹燥菌核，首載於《神農本草經》，列為上品[1]，有利水消腫，滲濕，健脾和寧心之功效，多用於治療小便不利，水腫脹滿，痰飲咳逆，脾胃氣虛，食少便溏，體倦乏力以及心神不安，驚悸，失眠等[2]。
茯苓資源豐富，藥理作用顯著，因此，20世紀70年代以來，中外學者對它的化學成分進行了廣泛的研究。本文從茯苓中分離了13個化合物，均為首次從茯苓中分離得到。
1 材料
Boetius 顯微熔點儀（溫度未較正）；MERCURY-300，400，500，600型核磁共振譜儀測定；ESI用Agilent 1100LC/MSD Trap SL 型質譜儀；柱色譜以及薄層色譜用矽膠為青島海洋化工廠生產；Sephadex LH-20為Pharmacia 產品；反相填料用ODS（YMC公司產品）； Luntech製備型HPLC以及YMC-Pack ODS-A反相製備柱（20 mm×250 mm，5 μm）。所用試劑均為分析純，由北京化學試劑廠生產。
茯苓由江蘇康緣藥業股份有限公司提供，由中國醫學科學院藥物研究所馬林研究員鑒定為茯苓P. cocos，標本保存於藥物研究所標本室，標本號ID-S2517。
2 提取分離
茯苓白色菌核20 kg，用95%乙醇加熱回流提取3次，每次分別提取2，1，1 h，合並提取液，減壓濃縮得浸膏250 g。將浸膏用水分散後分別用乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別得到乙酸乙酯部分101 g，正丁醇部分77 g，水部分68 g。乙酸乙酯部分與矽膠拌樣（1 000 g）後依次用99∶1，49∶1，19∶1，9∶1，0∶1的氯仿-甲醇係統洗脫，得到5個部分，分別為Fr.1～Fr.5。其中Fr.2采用矽膠柱色譜分離，氯仿-丙酮（99∶1～1∶1）梯度洗脫得到Fr.2A～Fr.2G。Fr.2B經製備型HPLC純化得到化合物1（3 mg），2（13 mg），Fr. 2A用Sephadex LH-20純化後經製備型HPLC純化，分別得到化合物3（3 mg），4（4 mg）。
Fr.1采用矽膠柱色譜分離，石油醚-丙酮（99∶1～0∶1）梯度洗脫得到Fr.1A～ Fr.1F。其中Fr.1A經Sephadex LH-20反複純化得到化合物6（9 mg）。Fr.1B經製備型HPLC純化得到化合物5（16 mg） ，7（8 mg），8（6 mg） ，10（6 mg）。Fr.1D用Sephadex LH-20反複純化，後經製備型HPLC分離，分別得到化合物9（4 mg），13（8 mg）。
Fr.5首先采用RP-C18反相柱色譜分離，甲醇-水（1∶4～9∶1）梯度洗脫得到Fr.5A～ Fr.5F。Fr.5A和Fr.5D經重結晶後分別得到化合物12 （8 mg），11（5 mg）。
3 結構鑒定
化合物1 白色晶體（甲醇），mp 253～256 ℃ 。ESI-（+）-MS m/z 509[M+Na]+。IR（KBr）νmax：1 681cm-1。1H-NMR（pyridine-d5，300 MHz） δ：1.00（3H，s，H-28），1.06（3H，s，H-29），1.14（3H，s，H-19），0.96，0.98（各3H，d，J=6.6 Hz，H-26，27），1.23（3H，s，H-18），1.47（3H，s，H-30），2.31（1H，m，H-25），2.91（1H，d， J=11.4 Hz，H-17），2.94（1H，m，H-20），4.54（1H，t，J=6.0 Hz，H-16），3.46（1H，t，J=6.0 Hz，H-3） 4.82，4.98（各1H，s，H-31）；13C-NMR（pyridine-d5，125 MHz） δ：179.3（C-21），156.0 （C-24），134.8（C-9），135.2（C-8），27.4（C-7），21.4（C-11），106.8（C-31），77.9（C-3），76.5 （C-16），57.1 （C-17），49.1 （C-14），48.8 （C-20），46.8 （C-13），44.4 （C-15），51.2 （C-5），39.8 （C-4），37.9 （C-10），30.2 （C-12），34.7 （C-25），33.6 （C-23），31.9 （C-22），36.9 （C-1），29.2 （C-28），25.7 （C-30），29.1 （C-2），19.4 （C-6），17.0 （C-29），20.1 （C-19），22.1 （C-26），21.9 （C-27），17.9 （C-18）。參考文獻[3]數據，化合物1鑒定為土莫酸。
化合物2 白色粉末，mp 272～275 ℃ 。ESI-（+）-MS m/z 507[M+Na]+。IR（KBr）νmax：1 706cm-1。1H-NMR（pyridine-d5，300 MHz）δ：5.62（1H，br s，H-7），5.39（1H，m，H-11），4.83，4.97 （各1H，s，H-31），4.53（1H，m，H-16），3.45（1H，d，J=7.2 Hz，H-3），1.42（3H，s，H-30），1.18（3H，s，H-18），1.09（3H，s，H-29），1.07 （3H，s，H-19），1.01（3H，s，H-18），0.99，0.96（各3H，d，J=7.5 Hz，H-26，27）；13C-NMR （pyridine-d5，100 MHz） δ：178.6 （C-21），156.1 （C-24），146.6（C-9），142.8 （C-8），121.3（C-7），116.1（C-11），107.0（C-31），78.0（C-3），76.4（C-16），57.6（C-17），49.8 （C-5），49.5（C-14），48.6（C-20），45.1（C-13），44.4（C-15），39.3（C-4），37.9（C-10），36.2 （C-12），34.1（C-25），33.2（C-23），31.5（C-22），30.6（C-1），28.7（C-28），26.7（C-30），26.6 （C-2），23.4（C-6），23.0（C-19），22.0（C-26），21.9（C-27），17.6（C-18），16.6（C-29）。參考文獻[3]數據，化合物2鑒定為去氫土莫酸。
化合物3 無定形粉末，HREI-MS m/z 427[M-H]-。1H-NMR（pyridine-d5，300 MHz） δ：5.92（1H，s，H-7），5.29（1H，dd， J=15.0，7.1 Hz，H-23），5.21（1H，dd，J=15.0，7.5 Hz，H-22），4.70（1H，m，H-3），1.09（3H，d， J=6.6 Hz，H-21），1.04（3H，s，H-19），0.95（3H，d， J=6.6 Hz，H-28），0.86（3H，d，J=6.0 Hz，H-27），0.84（3H，d，J=6.0 Hz，H-26），0.58（3H，s，H-18）；13C-NMR（pyridine-d5，150 MHz） δ：200.1（C-6），164.1（C-8），135.2（C-22），132.4 （C-23），120.7（C-7），77.4（C-5），67.1 （C-3），56.0（C-17），55.8（C-14），44.7（C-9），44.3（C-13），43.1（C-24），41.3（C-20），40.6（C-12），39.2（C-4），37.8（C-10），33.4（C-25），31.7（C-1），31.3（C-2），28.3（C-16），22.8（C-15），22.1（C-11），21.4（C-21），20.2（C-27），19.9（C-26），17.8（C-28），16.4（C-19），12.3（C-18）。參考文獻[4-5]中的數據，化合物3鑒定為3β，5α-二羥基麥角甾-7，22-二烯-6-酮。