特女貞苷與紅景天苷的大鼠在體胃腸吸收比較
藥代動力學
作者：李慧芬 張學蘭
[摘要]特女貞苷與紅景天苷是女貞子炮製前後含量變化較大的2種活性成分。為探討女貞子炮製增效機製，該實驗采用大鼠在體胃腸灌流模型，用HPLC測定給藥後不同時間點大鼠胃與小腸灌流流出液中特女貞苷與紅景天苷含量並計算吸收速率常數和吸收百分率，結果在特女貞苷的胃腸灌流流出液中均可檢出其次級苷紅景天苷。特女貞苷與紅景天苷在小腸中的吸收速率常數分別為0.055 3， 0.144 2 h-1， 4 h累計吸收率分別為24.46%， 60.14%，在胃中吸收速率常數分別為5.70， 8.26 h-1，4 h累計吸收率分別為34.21%， 47.23%。實驗證明特女貞苷在大鼠胃與小腸內均可被代謝為紅景天苷，紅景天苷較特女貞苷更利於胃腸吸收。結果提示女貞子炮製後補肝腎藥效增強與特女貞苷轉化為紅景天苷後更利於機體吸收有關。
[關鍵詞]特女貞苷；紅景天苷；在體胃腸吸收；女貞子
女貞子為臨床常用中藥，具有滋補肝腎、明目烏發的功效。酒蒸女貞子可緩和其寒滑之性，增強補肝腎作用，故曆代臨床應用中女貞子均以酒製品為主。女貞子主要含有環烯醚萜苷類、三萜類和苯乙醇類成分。特女貞苷（雙糖苷）為女貞子的主要活性成分，具有增強免疫作用[1]。《中國藥典》2010年版規定，女貞子與酒女貞子飲片中特女貞苷含量均不得少於0.70%[2]。紅景天苷（單糖苷）為特女貞苷的次級苷，是紅景天的主要活性成分，具有保護心腦血管、抗肝纖維化、抗腫瘤、增強免疫及改善認知能力等作用[3]。《香港中藥材標準》2010年版規定了女貞子藥材中紅景天苷的限量[4]。本課題組前期研究發現，女貞子經酒蒸或清蒸後，特女貞苷含量顯著降低，而紅景天苷和酪醇含量顯著升高[5-6]，但女貞子酒蒸增效機製尚未闡明。藥代學研究表明，紅景天苷口服後吸收迅速，生物利用度良好[7]，但未見特女貞苷的藥代學研究報道，特女貞苷與紅景天苷在體內的吸收代謝有何差異也未見報道。本實驗采用大鼠在體胃腸吸收法，研究特女貞苷和紅景天苷在大鼠胃和小腸的吸收差異；通過標準品對照，分析特女貞苷的大鼠胃腸代謝產物。為揭示女貞子酒蒸增效機製及女貞子飲片的藥效物質基礎提供科學依據。
1 材料
1.1 動物
雄性SD大鼠，體質量（200±20） g，由山東中醫藥大學試驗動物中心提供，動物許可證號SYXK（魯）20110019。
1.2 藥品與試劑
特女貞苷（本實驗室自製，經HPLC歸一化法檢測，質量分數為98.1%）；紅景天苷（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號110818-200404）；Kreb-Ringer′s營養液（簡稱K-R液，自製）；水合氯醛、酚紅（分析純）；高效液相用乙腈（色譜純）。
1.3 儀器
L-2000型高效液相色譜儀（日本日立公司）；UV-2000型紫外-可見分光光度計（河南兄弟儀器設備有限公司）；HL-2恒流泵（上海嘉鵬科技有限公司）。
2 方法與結果
2.1 實驗用試液的配製
K-R營養液的配製：分別稱密稱取NaCl 7.80 g， KCl 0.35 g， NaHCO3 1.37 g， NaH2PO4 0.32 g， MgCl2 0.02 g， 葡萄糖1.40 g，加適量純化水溶解， 加水至1 000 mL，混勻即得。
特女貞苷、紅景天苷對照品溶液的配製：分別稱取特女貞苷對照品和紅景天苷對照品適量，精密稱定，分別置於10 mL量瓶中，加乙醇定容，製成每1 mL含特女貞苷0.358 mg的對照品溶液和每1 mL含紅景天苷0.334 mg的對照品溶液。
特女貞苷、紅景天苷胃腸灌注液的配製：精密吸取特女貞苷對照品溶液和紅景天苷對照品溶液各5 mL，分別置於100 mL量瓶中，精密加入質量濃度為1.008 g·L-1的酚紅溶液2 mL，再分別用K-R液定容製成每1 mL含特女貞苷17.9 μg的胃腸灌注液和每1 mL含紅景天苷16.7 μg的胃腸灌注液。
2.2 大鼠在體小腸吸收試驗[8]
將SD大鼠禁食20 h，不禁水，腹腔注射10%水合氯醛溶液（3 mL·kg-1）麻醉後，固定。保持37 ℃體溫，沿腹中線剪開腹部，選取整個小腸腸段，在兩端各切一小口，在兩端小口處插入直徑為0.3 cm的橡膠插管，並用線紮緊。先將橡膠管放入37 ℃的生理鹽水中，以5 mL·min-1流速洗去腸管內容物至肉眼觀察流出液澄清。然後換成37 ℃ K-R營養液，平衡腸腔內環境，排淨腸內生理鹽水。取預熱至37 ℃的特女貞苷胃腸灌注液和紅景天苷胃腸灌注液各90 mL，先以5 mL·min-1流速循環10 min後，再將流速調至2 mL·min-1並開始計時。取樣時間點為0，0.25，0.5，1，1.5，2，2.5，3，4 h，取樣量為2 mL（同時補充等量的20.16 mg·L-1的酚紅供試液），分別用來測定酚紅、特女貞苷及紅景天苷的質量濃度。
2.3 大鼠在體胃吸收試驗[8]
將SD大鼠，禁食20 h，不禁水，腹腔注射10%水合氯醛溶液（3 mL·kg-1）麻醉後，固定。保持37 ℃體溫，沿腹中線剪開腹部，暴露胃，將賁門結紮，用K-R營養液衝淨胃腔，排淨內部液體後結紮幽門，注射器內吸取含藥供試液4 mL注入胃內，與K-R營養液混合後再抽回到注射器，重複幾次，使混合均勻後吸取混合液2 mL，測定其酚紅、特女貞苷及紅景天苷的質量濃度為藥物初始質量濃度，4 h後再從胃中抽出混合液2 mL，測定其酚紅、特女貞苷及紅景天苷的質量濃度為藥物終質量濃度。
2.4 胃與小腸循環液中酚紅含量的測定[9-10]
實驗過程中胃和小腸不僅吸收藥物，也吸收、分泌水分，導致供試液體積變化，故不能用直接測定藥物質量濃度的方法計算藥物的吸收。酚紅在胃腸道內不被吸收或吸收很少，因此在樣品溶液中加入定量酚紅，通過測定腸循環液中酚紅質量濃度的變化來間接測定胃腸循環液的體積變化，從而根據體積和循環液中藥物質量濃度計算出吸收的藥物量。紫外光譜顯示，酚紅在558 nm左右有最大吸收，而特女貞苷、紅景天苷對照品溶液在此波長下無吸收，故選擇在558 nm波長下，用紫外分光光度法測定胃腸循環液中酚紅的吸光度。