2.4.1 酚紅標準曲線繪製 精密稱取酚紅10 mg，置100 mL量瓶中，加K-R營養液溶解並稀釋至刻度，製成100 mg·L-1的酚紅儲備液。精密吸取酚紅儲備液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，分別置於10 mL量瓶中，加K-R營養液稀釋至刻度，即得係列質量濃度酚紅對照品溶液。分別吸取各標準溶液0.5 mL，加入0.2 mol·L-1 NaOH溶液5 mL，以0.2 moL·L-1 NaOH溶液為空白，在558 nm處測定吸光度，以吸光度A對酚紅質量濃度C（mg·L-1）進行線性回歸，得標準曲線方程A=0.017 8C+0.003 2，r=0.998 2，酚紅質量濃度在10.08～60.48 mg·L-1線性良好。
2.4.2 循環液中酚紅質量濃度的測定 取大鼠不同時間點的在體腸循環液以及在體胃初始混合液和4 h胃中混合液各2 mL，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液備用。精密吸取上述濾液各0.5 mL，分別加入0.2 mol·L-1 NaOH溶液5 mL，測定吸光度，將其代入標準曲線方程求得酚紅質量濃度。
2.5 灌注液中特女貞苷和紅景天苷含量的測定
2.5.1 色譜條件 色譜柱為Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流速1.0 mL·min-1；流動相為乙腈（A）-水（B），0～15 min， A 15%～30%；檢測波長224 nm；進樣量20 μL；柱溫25 ℃。
2.5.2 特女貞苷、紅景天苷灌注液標準曲線的繪製 精密稱取特女貞苷對照品2.65 mg和紅景天苷對照品2.30 mg，分別用適量乙醇溶解並定容至5 mL量瓶中，各精密吸取上述溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mL至5 mL量瓶中，用含酚紅的K-R液定容至刻度，製成係列質量濃度標準液，於上述色譜條件下測定，用測定所得色譜峰麵積（S）對質量濃度（C，mg·L-1）進行線性回歸，計算標準曲線方程。特女貞苷的標準曲線方程為S=12 786C+3 921.5，r=0.999 9，特女貞苷質量濃度在10.6～53 mg·L-1，線性關係良好。紅景天苷的標準曲線方程為S=24 055C-11 773，r=0.999 7，紅景天苷質量濃度在9.2～46 mg·L-1，線性關係良好。
2.5.3 灌注液中特女貞苷、紅景天苷質量濃度的測定 取不同時間點的大鼠在體腸循環液以及在體胃初始藥液和4 h藥液各2 mL，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液備用。精密吸取上述濾液各20 μL，注入液相色譜儀，將得到的峰麵積值代入2.5.2項下標準曲線方程，計算特女貞苷、紅景天苷的質量濃度。
2.6 數據分析及結果
小腸吸收試驗中，根據循環液中酚紅質量濃度計算出供試液的體積，根據每一時間段藥物質量濃度和供試液體積的變化計算出腸循環液中的剩餘藥量，以剩餘藥量的對數值對取樣時間作圖得一直線，由直線的斜率計算出吸收速率常數Ka。大鼠在體腸循環灌流4 h 後，計算藥物的累計吸收量和累計吸收百分率。考察胃吸收時，根據藥物初始質量濃度和終質量濃度之差計算其4 h累計吸收量及累計吸收百分率。
3 小結與討論
本研究結果顯示，特女貞苷在大鼠胃與小腸內均可被代謝為紅景天苷，紅景天苷在胃腸道中吸收速率常數、累計吸收量和累計吸收百分率均明顯大於特女貞苷，說明紅景天苷較特女貞苷更有利於吸收。特女貞苷為雙糖苷，而紅景天苷為單糖苷，提示雙糖苷水解為單糖苷後更易吸收。本研究結果還表明，特女貞苷和紅景天苷在胃中的累計吸收量均較其在小腸中的累計吸收量少，推測兩者主要的吸收部位在小腸。
特女貞苷在女貞子中含量較高，特女貞苷的結構特點是其分子中的環烯醚萜部分通過其裂環上的酯鍵與紅景天苷相連，屬於酯苷類。酯苷的苷鍵既有縮醛的性質又有酯的性質，易被稀酸和稀堿水解[11]。本課題組前期研究發現，特女貞苷加水清蒸後即可水解生成紅景天苷。紅景天苷含有酚羥基，具有較強的生物活性和較好的水溶性，且相對分子質量較特女貞苷小。作者推測，女貞子炮製增效的機製與酒蒸後特女貞苷水解生成紅景天苷而更利於機體吸收有關，紅景天苷可能是女貞子飲片發揮藥效的主要活性物質。女貞子中的異女貞苷、G13、女貞子苷等環烯醚萜苷類均含有紅景天苷母核，因此，深入研究女貞子炮製過程中其他環烯醚萜苷類成分的變化規律、轉化機製及其吸收代謝差異，對揭示女貞子的炮製機製具有重要意義，為女貞子飲片的規範化炮製及開發提供了線索和依據。
本研究考察了特女貞苷與紅景天苷在胃腸道中的吸收情況，對探索二者合理給藥途徑和給藥方案有一定的指導意義。實驗結果表明，特女貞苷在胃腸道中均可被代謝成紅景天苷，而在胃中尤其明顯，推測可能由於大鼠胃中胃酸的作用使特女貞苷水解，在腸道發生的水解則可能與腸道中所含的水解酶及堿性腸液有關，兩者在胃腸道中吸收代謝和轉運機製還需要進一步的實驗研究。
紅景天的補益作用強於人參、刺五加，且沒有燥熱引起便秘等不良反應，被譽為“高原人參”。藥理研究證明，紅景天苷是紅景天屬植物藥用價值的主要質量指標。但是絕大多數紅景天的種生長在高寒山區的雪線以下，其生態係統非常脆弱，目前由於過度放牧和無計劃的人為采挖，導致紅景天屬植物瀕臨滅絕[12]。本實驗結果提示，從女貞子中提取特女貞苷水解成紅景天苷應用，可緩解紅景天屬植物的藥用壓力，更好地保護紅景天資源。
[參考文獻]
[1] 蔡溱， 石力夫. 特女貞甙體外對小鼠脾淋巴細胞轉化和自然殺傷細胞活性的影響[J]. 第二軍醫大學學報， 1998， 19（1）： 76.