分子生物學鑒定是應用DNA分子標記技術鑒定中藥原植物及其藥材和飲片的方法，在物種鑒定方麵表現出了獨特優勢，如RFLP（restriction fragment length polymorphism）技術、RAPD（random amplified polymorphism DNA），SSR（simple sequence repeat）技術等彌補和克服了傳統鑒定方法的諸多缺陷，得到了廣泛的應用，但這些分子標記技術往往表現出通用性低，可重複性不強的特點[23]。與其他分子鑒定方法相比，DNA條形碼技術具有明顯優勢，供試材料可以不受發育階段、環境條件、存在形態等影響；鑒定過程更加趨於標準化，操作簡單等，在中藥鑒定領域中展示了廣闊的應用前景[11]。而且隨著DNA條形碼技術的逐步發展，研究者又提出了葉綠體超級條形碼的概念，並得到了初步應用[24]。鎖陽應用曆史悠久，是我國重要的民族中藥，近年來，隨著其用量的逐漸增多，市場上混偽品時有出現，為了確保臨床用藥安全，本研究采用DNA條形碼技術對中藥材鎖陽及其常見混偽品進行鑒定研究。結果表明ITS2條形碼序列可有效鑒別鎖陽藥材及其混偽品，為鎖陽藥材鑒定的標準化奠定了基礎，具有重要的應用和參考價值。
直接從藥用植物葉片中提取基因組DNA的方法已相對成熟[10]，而藥材DNA的提取仍然需要探索，能否獲得藥材的基因組DNA是中藥材DNA條形碼技術研究的前提和基礎，也是該技術在藥材鑒定領域推廣應用的必要條件[18，25]。為了獲得鎖陽藥材的基因組DNA，本研究對常用的試劑盒法進行了如下改良：PVP是酚類物質的絡合物，可以與多酚結合形成不溶的絡合物，有效去除多酚，同時它還可以和多糖結合，去除多糖，進而減少DNA中酚類和糖類物質的汙染。經過摸索，本研究中加入3%的PVP-40，可以顯著提高鎖陽藥材DNA的提取效果；為了獲得盡可能多的DNA，本研究采用56 ℃水浴過夜，使細胞裂解液充分裂解，可有效提高DNA提取的成功率。另外，植物和真菌中廣泛存在ITS2片段，如藥材表麵有真菌汙染，PCR擴增產物就有可能是真菌的ITS2片段，從而影響實驗結果。鎖陽藥材多成塊狀，硬度較大，而且表麵經常伴有雜質，為避免PCR擴增過程中真菌的汙染，首先用75%乙醇仔細擦洗其表麵並刮去外皮，然後再用刀片刮取其內部組織供提DNA用。結果顯示，本研究獲得的ITS2序列不存在真菌ITS2序列的幹擾，有效提高了利用DNA條形碼技術鑒定鎖陽藥材的穩定性和準確性。
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