黃苞大戟化學成分研究
化學
作者：楊大鬆 魏建國 楊永平 楊永紅 李曉莉
[摘要] 對黃苞大戟Euphorbia sikkimensis地上部分的化學成分進行研究。應用矽膠，Sephadex LH-20， RP-18等色譜技術進行分離純化，采用NMR等譜學方法鑒定結構。從黃苞大戟地上部分的90%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分離得到16個化合物，分別鑒定為柚皮素（1）、山柰酚（2）、槲皮素（3）、山柰酚-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（4）、槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（5）、槲皮素-3-O-（2″-沒食子酰基）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（6）、麥角甾醇過氧化物（7）、豆甾-5-烯-7-羰基-3β-甾醇（8）、3β-羥基-4α，14α-二甲基-5α-麥角甾醇-8，24（28）-二烯-7-酮（9）、β-穀甾醇（10）、10-葫蘆二烯醇（11）、莨菪亭（12）、沒食子酸乙酯（13）、對羥基苯甲醛（14）、3-羥基苯乙醇（15）、2，4-二羥基-6-甲氧基苯乙酮（16）。所有化合物均為首次從黃苞大戟中分離得到，其中化合物1， 4～8， 15為首次從大戟屬植物中分離得到。
[關鍵詞]黃苞大戟；黃酮苷；麥角甾醇；三萜；酚類化合物
特殊的生態環境不僅對植物的演化和變異具有重要的作用，而且對植物產生的次生代謝產物也具有很大影響。西藏由於空氣稀薄、日照充足、氣溫較低、降水較少與複雜多樣的地形地貌共同形成了獨特的高原氣候，其獨特的地理環境及氣候條件勢必造就了特殊的生物資源。黃苞大戟為大戟科大戟屬多年生草本植物，產於廣西、貴州、湖北、四川、雲南和西藏[1]。黃苞大戟作為一種鄂西民族植物藥材，用於腎炎水腫、腹脹、便秘，瘧疾，風濕，黃疸等疾病的治療[2]。目前對黃苞大戟的化學成分研究未見報道，為了闡明其藥效物質基礎和發現結構新穎的活性次生代謝產物，本課題組對產自西藏林芝地區的黃苞大戟地上部分的90%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物的化學成分進行了係統的研究，發現其中含有二萜、三萜、甾體、生育酚衍生物等類型的次生代謝產物[3-4]，在本課題組後續的研究中又分離得到其他16個化合物，運用各種波譜學手段鑒定了他們的結構。所有化合物均為首次從黃苞大戟中分離得到，其中化合物1，4～8，15為首次從大戟屬植物中分離得到，本論文對這些次生代謝產物的提取、分離和波譜數據進行報道。
1材料
Finnigan MAT 90型質譜儀，Bruker AM-400（400 MHz），DRX-500（500 MHz）和Avance Ⅲ 600（600 MHz）核磁共振光譜儀，以TMS為內標測定；Agilent 1200型HPLC，Zorbax SB-C18色譜柱（分析柱4.6 mm×250 mm，5 μm；半製備柱9.4 mm× 250 mm，5 μm），BUCHI R-210旋轉蒸發儀，柱色譜矽膠（200～300目）及薄層色譜矽膠板GF254均為青島海洋化工廠生產，Sephadex LH-20為Amersham Biosciences公司產品，RP-18為Merck公司產品，MCI為三菱公司產品。
黃苞大戟采自西藏林芝地區，由中國科學院昆明植物研究所楊永平研究員鑒定為黃苞大戟Euphorbia sikkimensis Boiss，標本（Yangyp-）保存於中國科學院昆明植物研究所標本館。
2提取與分離
黃苞大戟的幹燥地上部分11 kg，粉碎後用90%乙醇室溫下冷浸24 h，藥材被重複提取3次，過濾後，提取液減壓條件下回收至無醇味，用水混懸，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，得乙酸乙酯浸膏1 054 g，浸膏用乙醇溶解經MCI脫色後用矽膠柱色譜（氯仿-丙酮1∶0～1∶1）梯度洗脫進行粗分，合並相同流分，得6部分（Fr.1～Fr.6），Fr.1經凝膠柱色譜（氯仿-甲醇 1∶1）純化後用RP-18（甲醇-水 3∶7～1∶0）梯度洗脫劃為6小部分（Fr.1-1～Fr.1-6），Fr.1-5經矽膠柱色譜（氯仿-乙酸乙酯4∶1）分離為2部分，第一部分經HPLC半製備（87%甲醇）得到化合物7（1 mg，tR=7.3 min），8（5 mg，tR=8.9 min），9（1 mg，tR=10.3 min），第二部分經反複重結晶得化合物10（63 mg），Fr.1-6經矽膠柱色譜（石油醚-乙酸乙酯 4∶1）純化得化合物11（8 mg）； Fr.4經凝膠柱色譜（氯仿-甲醇 1∶1）分離為3部分，第2部分經矽膠柱色譜（氯仿-乙酸乙酯 2∶1）反複純化得化合物12（30 mg），16（23 mg），第三部分經矽膠柱色譜（氯仿-丙酮 4∶1）反複純化得化合物13（12 mg），14（11 mg），15（23 mg）； Fr.5經凝膠柱色譜（氯仿-甲醇1∶1）分離為2部分，第一部分經矽膠柱色譜（氯仿-丙酮 3∶2）得化合物1（3 mg），第二部分經矽膠柱色譜（氯仿-甲醇 9∶1）純化得化合物2（9 mg），3（35 mg）； Fr.6經凝膠柱色譜（氯仿-甲醇1∶1）分離為3部分，第一部分經矽膠柱色譜（氯仿-甲醇4∶1）反複純化得化合物4（54 mg），5（53 mg），第2部分經膠柱色譜（氯仿-甲醇3∶2）純化的化合物6（90 mg）。
3結構鑒定
化合物1 無色粉末； 1H-NMR（acetone-d6，400 MHz）δ：12.17（1H，br s，5-OH），9.68（1H，br s，7-OH），8.56（1H，br s，4′-OH），7.39（2H，dd，J=1.8，6.8 Hz，H-2′，6′），6.89（2H，dd，J=1.8，6.8 Hz，H-3′，5′），5.95（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），5.94（1H，d，J=2.2 Hz，H-6），5.45（1H，dd，J=3.0，12.9 Hz，H-2a），3.18（1H，dd，J=12.9，17.1 Hz，H-3a），2.72（1H，dd，J=3.0，17.1 Hz，H-3e）； 13C-NMR（acetone-d6，150 MHz）δ：79.9（C-2），43.4（C-3），197.2（C-4），165.2（C-5），96.7（C-6），167.3（C-7），95.8（C-8），164.3（C-9），102.9（C-10），130.7（C-1′），129.0（C-2′，6′），116.1（C-3′，5′），158.7（C-4′）。以上數據與文獻[5]報道的柚皮素數據基本一致。
化合物2 黃色無定型粉末； 1H-NMR（acetone-d6，400 MHz）δ：12.17（1H，s，5-OH），9.75（1H，s，7-OH），9.08（1H，s，4′-OH），8.06（1H，s，3-OH），8.14（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′），7.01（2H，d，J=8.0 Hz，H-3′，5′），6.52（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.26（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）； 13C-NMR（acetone-d6，100 MHz）δ：147.0（C-2），136.6（C-3），176.6（C-4），162.3（C-5），99.1（C-6），164.9（C-7），94.4（C-8），157.7（C-9），104.1（C-10），123.3（C-1′），130.4（C-2′，6′），116.3（C-3′，5′），160.1（C-4′）。以上波譜數據與文獻[6]報道的山柰酚數據基本一致。
化合物3 黃色無定形粉末； 1H-NMR（acetone-d6，400 MHz）δ：7.82（1H，d，J=2.2 Hz，H-2′），7.70（1H，dd，J=2.2，8.5 Hz，H-6′），6.99（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），6.52（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.26（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）； 13C-NMR（acetone-d6，150 MHz）δ：147.0（C-2），136.8（C-3），176.6（C-4），162.3（C-5），99.1（C-6），165.0（C-7），94.5（C-8），157.8（C-9），104.1（C-10），123.8（C-1′），115.8（C-2′），145.9（C-3′），148.4（C-4′），116.3（C-5′），121.5（C-6′）。以上波譜數據與文獻[6]報道的槲皮素數據基本一致。
化合物4 黃色無定形粉末； ESI-MS m/z 417[M-H]-； 1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：12.60（1H，br s，5-OH），8.07（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.87（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′），6.43（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.19（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.33（1H，d，J=5.2 Hz，H-1″），3.71（1H，t，J=5.2 Hz，H-2″），3.67（1H，m，H-4″），3.64（1H，m，H-3″），3.56（1H，dd，J=5.1，11.6 Hz，H-5″a），3.23（1H，d，J=11.6 Hz，H-5″e）； 13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：156.4（C-2），133.5（C-3），177.6（C-4），161.2（C-5），98.7（C-6），164.3（C-7），93.7（C-8），156.3（C-9），104.0（C-10），120.7（C-1′），131.0（C-2′，6′），115.3（C-3′，5′），160.1（C-4′），101.2（C-1″），70.8（C-2″），71.6（C-3″），66.1（C-4″），64.3（C-5″）。以上波譜數據與文獻[7]報道的kaempferol-3-O-α-L-arabinopyranoside數據基本一致。
化合物5 黃色無定型粉末； ESI-MS m/z 433[M-H]-； 1H-NMR（acetone-d6，400 MHz）δ：12.37（1H，s，5-OH），9.78（1H，s，7-OH），8.58（1H，s，4′-OH），8.52（1H，s，3′-OH），7.74（1H，d，J=2.1 Hz，H-2′），7.54（1H，dd，J=2.1，8.5 Hz，H-6′），6.82（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），6.39（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.14（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），5.15（1H，d，J=6.1 Hz，H-1″），3.83（1H，t，J=6.1 Hz，H-2″），3.74（1H，m，H-4″），3.67（1H，dd，J=4.2，12.1 Hz，H-5″a），3.61（1H，m，H-3″），3.33（1H，dd，J=2.1，12.1 Hz，H-5″e）； 13C-NMR（acetone-d6，100 MHz）δ：157.9（C-2），135.3（C-3），179.0（C-4），162.9（C-5），99.6（C-6），165.1（C-7），94.5（C-8），157.8（C-9），105.4（C-10），122.7（C-1′），115.9（C-2′），145.5（C-3′），149.3（C-4′），117.2（C-5′），122.9（C-6′），104.0（C-1″），72.4（C-2″），73.6（C-3″），68.0（C-4″），66.0（C-5″）。以上波譜數據與文獻[8]報道的quercetin-3-O-α-L-arabinopyranoside數據基本一致。