定量指紋圖譜在醒腦通絡注射液氨基酸成分分析中的應用
製劑與炮製
作者：胡軍華 林夏 仲豔 李慧 吳健雄 李家春 王振中 蕭偉
[收稿日期] 2013-10-09
[基金項目] 國家“重大新藥創製”科技重大專項（2011ZX09401-014）
[通信作者] *蕭偉，研究員級高級工程師，博士，研究方向為中藥新藥的研究與開發，Tel：（0518）81152337，E-mail
[作者簡介] 胡軍華，工程師，主要從事藥物分析與質量標準研究，Tel：13655139779，E-mail
[摘要] 目的：采用定量指紋圖譜對醒腦通絡注射液成品中的氨基酸成分進行控製，以此來評價其產品的質量。方法：采用AccQ Tag柱前衍生的方法，建立醒腦通絡注射液中氨基酸成分的定量指紋圖譜方法，對10批醒腦通絡注射液中的各氨基酸進行定量檢測，並結合10批成品的相似度指標，綜合評價其質量。結果：醒腦通絡注射液中含有12種氨基酸，各氨基酸特征峰定量結果均一、穩定，10批成品指紋圖譜相似度在0.90以上。結論：該方法準確、可行，是一種簡便、有效的中藥質量評價手段。
[關鍵詞] 醒腦通絡注射液；定量指紋圖譜；AccQ Tag柱前衍生；氨基酸
醒腦通絡注射液是由江蘇康緣藥業股份有限公司研發的中藥注射劑，處方由水牛角、地黃、黃芩、三七、赤芍、人工麝香共6味組成，臨床上用於治療腦出血性中風[1]。本研究參照《中國藥典》2010年版一部附錄[2]的要求及文獻[3-10]采用AccQ Tag柱前衍生法建立了成品中的氨基酸指紋圖譜，並對各氨基酸進行了定量研究，建立了較全麵的氨基酸質量控製方法，以更為有效快捷的控製醒腦通絡注射液的內在質量。
1 材料與方法
1.1 材料
Waters2695-2487高效液相色譜儀（美國沃特斯特公司），電熱恒溫鼓風幹燥箱（上海新苗公司），快速渦旋混合器（美國安勝科技有限公司）。AccQ Tag 氨基酸測定試劑盒（包括AccQ Flour氨基酸專利衍生劑、專用氨基酸分析柱、玻璃樣品衍生管）、17種混合氨基酸標準液（濃度均為2.5 mol·mL-1） 美國Waters 公司；乙腈（色譜純）。水 （超純水 ）；其餘試劑均為分析純。醒腦通絡注射液來自江蘇康緣藥業股份有限公司。
1.2 色譜條件
AccQ Tag色譜柱（3.9 mm×150 mm， 5 μm）柱；柱溫37 ℃；流動相A：按1∶10將AccQ TagA濃液用水稀釋，流動相B：乙腈，C：高純水，梯度洗脫程序。流速1 mL·min-1；檢測波長248 nm；進樣量10 μL，理論板數按蘇氨酸峰計算應不得低於4 000。
1.3 對照品溶液的製備
用移液器移取17種氨基酸的標樣100 μL，加0.90 mL水稀釋，混勻，備用。該標準溶液的氨基酸濃度為0.25 mol·L-1。精確吸取10 μL於衍生用小管中（6 μm×50 mm），加入70 μL 硼酸鹽緩衝液，渦旋混合後，在渦旋狀態下加入20 μL 剛配好的AccQ Fluor 衍生劑，保持渦旋混合15 s。室溫放置l min 後用石蠟膜封口，於50 ℃烘箱內加熱10 min，取出冷至室溫，即得。
1.4 供試品溶液的製備
精密吸取醒腦通絡注射液1 mL，置10 mL量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
1.5 空白溶液的製備
以純化水作為空白溶液。
1.6 衍生方法
①將烘箱開啟並恒溫至55 ℃；②用清潔的移液管分別取參照物溶液、供試品溶液及空白溶液各10 μL，分別注入6 μm×50 mm的衍生管底部；③換一清潔移液管頭，加AccQ Fluor硼酸鹽緩衝液70 μL至衍生管中，渦旋混合；④另換一清潔移液管頭吸取20 μL剛剛配好的AccQ Fluor衍生劑，在渦旋狀態下加到衍生管中，並保持渦旋混合10～15 s；⑤在室溫下放置1 min；⑥將衍生管用封口膜封口，放在55 ℃烘箱內加熱10 min，取出移入100 μL的進樣管，即得。
分別精密吸取衍生後的參照物溶液、供試品溶液及空白溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定。
2 結果與分析
2.1 指紋圖譜方法驗證與檢驗
2.1.1 指紋圖譜方法學考察 比較各批號醒腦通絡注射液樣品的指紋圖譜，含有13個共有色譜峰，各峰分離度良好，分離度在規定範圍內。
1.絲氨酸；2.穀氨酸；3.甘氨酸；4.精氨酸；5.蘇氨酸（S）；6.丙氨酸；7.脯氨酸；8.纈氨酸；9.賴氨酸；10.異亮氨酸；11.亮氨酸；12.苯丙氨酸。