“一測多評”法用於梔子金花丸多成分含量測定的可行性研究
製劑與炮製
作者：趙倩 馮偉紅 張啟偉 王智民 高慧敏 李春 楊立新 劉曉謙 閆利華 朱晶晶 陳兩綿
[收稿日期] 2014-02-21
[基金項目] 國家藥品標準提高暨2015年版藥典科研項目；中醫藥行業科技專業項目（200707009），國家“重大新藥創製”科技重大專項（2012ZX09103201-009）；國家科技支撐計劃項目（2011BAI03B01）；國家重點基礎研究發展計劃（973）項目（2012CB724001）；國家自然科學基金項目（81274079）
[通信作者] *馮偉紅，副研究員，研究方向為中藥質量分析，E-mail；*王智民，研究員，研究方向為中藥化學與質量控製，E-mail
[作者簡介] 趙倩，碩士研究生，E-mail
[摘要] 目的：利用一個對照品同步測定梔子金花丸中10種成分的含量，探討“一測多評”技術在中成藥不同類型化合物質量評價中應用的可行性。方法： 以梔子金花丸為研究對象，采用高效液相色譜法，以大黃素為內參物，在254 nm檢測波長下，建立小檗堿、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、蘆薈大黃素、漢黃芩素、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚與大黃素間的相對校正因子。采用外標法測定梔子金花丸中大黃素的含量，通過待測成分間的相對校正因子計算梔子金花丸中其他9種成分的含量；並將“一測多評”法的計算值與外標法實測值用相對誤差進行評價，以驗證“一測多評”法的技術可行性和方法適用性。結果：2種計算結果沒有顯著性差異，相對誤差[1]，因此多成分同步測定的質量控製模式應運而生，但商品化對照品的供不應求和多指標控製高昂的檢測費用限製了該模式在實際生產、科研和監管領域的應用[2]。“一測多評”中藥質量評價模式為解決該矛盾提供了新思路。該模式提出後在單味中藥材[3-11]和中藥複方製劑[12-14]的質量控製研究中得到了廣泛應用，但均以同一類型化合物的質量控製研究居多。本研究以梔子金花丸中的黃連生物堿、黃芩黃酮和大黃遊離蒽醌3種不同結構類型的10個化學成分為研究對象，探討“一測多評”技術在中成藥多組分質量控製中應用的技術可行性和方法適用性。
梔子金花丸始載於《宣明論方》[15]，由梔子、黃芩、大黃、黃連、黃柏、金銀花、知母、天花粉8味中藥組成，梔子金花丸具有清熱瀉火、涼血解毒的功效，用於肺胃熱盛、口舌生瘡、牙齦腫痛、目赤眩暈、咽喉腫痛等[16]。目前的文獻報道中對梔子金花丸的質量控製研究主要是借助常規HPLC進行同類型化合物的含量測定[17-21]，2010年版《中國藥典》中也僅以梔子苷為檢測指標，難以真正體現和保證梔子金花丸的內在質量。依據梔子金花丸的功效、適應症及各單味藥所含成分已知的藥理作用推測，黃連生物堿、黃芩黃酮和大黃遊離蒽醌應為其主要藥效成分，因此對小檗堿、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚等10個成分進行質量控製可有效地保證該藥的質量和藥效。
1 材料
Shimadzu LC20A 高效液相色譜儀，包括LC-20AT溶液傳輸單元，SIL-20A 自動進樣器，SPD-M20A 二極管陣列檢測器，LC Solution色譜工作站（日本島津公司）；Waters Alliance 高效液相色譜儀，包括2695 溶劑管理係統，2996二極管陣列檢測器，Empower2 色譜工作站（美國WATERS公司）。 Syncronis C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm），Welchrom C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm），SpursilTM C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm），Accurasil C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）。
對照品鹽酸小檗堿（批號110713-200911，質量分數以86.8%計）、黃芩苷（批號110715-201016，質量分數以94.0%計）、黃芩素（批號111595-200905）、蘆薈大黃素（批號110795-201007）、大黃素（批號110756-200110）、大黃酚（110796-200716）、大黃酸（批號110757-200206）和大黃素甲醚（批號110758-201013）均購自中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用；漢黃芩苷（批號H-019-110325），漢黃芩素（批號H-029-111222）購自瑞芬思生物科技有限公司，HPLC級，純度≥98%。甲醇、乙腈為HPLC級，美國Fisher公司；水為哇哈哈純淨水，其餘試劑均為分析純。
藥品梔子金花丸為來源於各地藥品零售商店的商品。
2 方法與結果
2.1 多成分同步測定方法的建立與方法學考察
2.1.1 色譜條件
Syncronis C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相甲醇（A）-乙腈（B）-0.2%磷酸溶液（C），梯度洗脫，0～60 min， 40%～4% A，0%～60% B；60～90 min，4%～10% A，60%～85% B；流速1 mL·min-1，柱溫30 ℃，檢測波長254 nm。
2.1.2 供試品溶液的製備
取梔子金花丸粉末（過40目篩）約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，取出放至室溫，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，過0.22 μm微孔濾膜，即得。
A.供試品；B.混合對照品；C.陰性供試品（缺黃連、黃芩、大黃、黃柏）；1.小檗堿；2.黃芩苷；3. 漢黃芩苷；4.黃芩素；5.蘆薈大黃素；6.漢黃芩素；7.大黃酸；8.大黃素；9.大黃酚；10.大黃素甲醚。
2.1.3 對照品溶液的製備
取對照品鹽酸小檗堿、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、蘆薈大黃素、漢黃芩素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚適量，精密稱定，加甲醇製成每1 mL分別含上述對照品0.054 7，0.041 0，0.054 0，0.219 0，0.005 68，0.073 0，0.005 30，0.006 40，0.017 1，0.005 20 mg的混合對照品溶液，備用。
2.1.4 方法學考察
2.1.4.1 線性關係考察 分別精密吸取2.1.3項下的混合對照品溶液1，5，10，15，20，25，30，35 μL注入高效液相色譜儀，測定小檗堿、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、蘆薈大黃素、漢黃芩素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的峰麵積。以測得的響應信號和被測物的進樣質量用最小二乘法進行線性回歸，得到各成分的回歸方程以及線性範圍。結果表明，待測成分在如下範圍內成良好的線性關係。
2.1.4.2 精密度試驗 取2.1.2項下同一份梔子金花丸供試品溶液，於同一日內連續進樣6次，進樣量10 μL，測定小檗堿、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、蘆薈大黃素、漢黃芩素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的峰麵積，計算RSD。結果各待測成分峰麵積的RSD分別為1.6%，0.11%，0.10%，0.059%，0.63%，0.11%，0.24%，0.15%，0.18%，1.4%，結果表明儀器的精密度良好。