通絡醒腦泡騰片對大鼠慢性腦缺血致學習記憶功能損傷的影響
藥理
作者：胡勇 巨少華 張蔭傑 熊敏 徐世軍 馬雲桐 鍾振東
[收稿日期] 2013-10-16
[基金項目] 國家“重大新藥創製”科技重大專項（2013ZX09103002-008）；四川省傑出青年學術技術帶頭人資助計劃（2011JQ0014）；四川省學術和技術帶頭人培養資金項目（重點）；四川省“十一五”支撐項目（2010SZ0195）；四川省教育廳自然科學重點項目（12ZA041）；成都市產業發展技術支撐計劃——高校院所應用基礎研究（12DXYB321JH-002）
[通信作者] *徐世軍，Tel：（028）61800231，E-mail
[作者簡介] 胡勇，Tel：（028）61800231，E-mail
[摘要] 目的：考察通絡醒腦泡騰片對慢性腦缺血致學習記憶障礙模型大鼠學習記憶及海馬Na+-K+-ATP酶表達的影響。方法：采用雙側頸總動脈結紮法（2-VO）製作SD種大鼠慢性腦缺血致學習記憶障礙模型。將造模成功大鼠50隻隨機分為模型對照組、甲磺酸雙氫麥角堿片組（0.7 mg·kg-1）、通絡醒腦泡騰片高、中、低劑量組（7.56，3.78，1.59 g·kg-1），另取10隻假手術動物作為對照組。10 mL·kg-1·d-1連續灌胃90 d。給藥第86天進行Morris水迷宮訓練，第90天進行學習記憶能力測試；腦組織用10%甲醛固定，常規製片、染色後進行病理形態學觀察；采用免疫組化和圖像分析技術檢測海馬區Na+-K+-ATP酶的表達。結果：通絡醒腦泡騰片各給藥組與模型組比較均能顯著縮短訓練第5天的逃避潛伏期，顯著增加第一象限進入次數、經過逃逸平台次數和進入有效區域次數（P[1]。AD患者葡萄糖代謝率明顯下降是AD的一個顯著特征[2]。研究表明AD患者葡萄糖/能量代謝障礙往往出現在行為學、電生理或器質性損傷之前，表明能量代謝障礙是AD的早期信號[3]。慢性腦缺血導致認知功能損害的病理生理基礎在於：能引起能量代謝障礙、葡萄糖代謝減少、蛋白質合成異常、神經遞質改變、膽堿能受體缺失、腦白質損害和神經元缺陷等。因此慢性腦缺血引起的學習記憶障礙模型，可作為AD的研究模型[1]。課題組前期在分析AD病機演變規律後提出了AD是一個“漸進的、三維的、由腦能量代謝障礙啟動的、由功能性改變緩慢演變為器質性改變的、存在物質流、能量流和信息流障礙並相互影響的慢性神經退行性疾病”的認識[4-5]。Na+-K+-ATP酶是細胞膜上重要的膜蛋白，其活性是反映機體生理功能衰退極為敏感的指標，是體內能量代謝的重要檢測指標[6]。通絡醒腦泡騰片是以古方芎歸湯為基礎創製的專利方藥，由川芎、黃芩、當歸組成，具有活血通絡，醒腦通竅，解毒益智的作用[7]。本文采用雙側頸總動脈永久結紮法致腦慢性腦缺血行學習記憶障礙模型，以Morris水迷宮，腦組織病理形態學及免疫組化法評價通絡醒腦泡騰片抗癡呆作用及其對海馬Na+-K+-ATP酶表達的影響。
1 材料
1.1 藥物與試劑 通絡醒腦泡騰片（原生藥4.5 g/片，由本課題組自製，批號20100304）；甲磺酸雙氫麥角堿片（天津華津製藥有限公司，批號2C834T）；Na+-K+-ATP酶一抗：兔抗大鼠IgG（美國Santa cruz公司，批號SC-30538）；二抗：生物素化山羊抗兔IgG（H+L），ZB-2010（北京中山金橋生物有限公司，批號V0527）；三抗：辣根過氧化酶標記鏈黴素卵蛋白（HRP/A-V），批號V7023；DAB顯色試劑盒：Kit ZL1-9032，批號753223A ，均由北京中衫金橋生物有限公司提供，其餘所用試劑均為國產分析純。
1.2 動物 SD大鼠，SPF級，雌雄各半，體重220～260 g，由四川省醫學科學院實驗動物研究所提供，動物合格證號SCXK（川）2008-24；實驗場地為國家中醫藥管理局成都中醫藥大學中藥藥理三級實驗室，編號TCM2032043。大鼠均在室溫22～24 ℃，明暗周期12 h/12 h條件下，自由飲水攝食。