苦豆腎茶方對免疫性前列腺炎模型大鼠ICAM—1，INF—γ，MCP—1的影響
藥理
作者：夏立營 劉維佳 李明喜 葛文津 高學敏 張建軍
[收稿日期] 2013-11-21
[通信作者] *張建軍，研究員，博士生導師，Tel：（010）64286993，E-mail
[作者簡介] 夏立營，副主任醫師，Tel：（010）62835654，E-mail
[摘要] 目的：觀察苦豆腎茶方對免疫性前列腺炎大鼠前列腺組織ICAM-1，INF-γ，MCP-1的影響。方法： 采用純化大鼠前列腺蛋白結合免疫佐劑法於第1，28天在大鼠背部多點注射建立實驗性自身免疫性前列腺炎大鼠模型，並隨機分為模型組、苦豆腎茶方高、低劑量組、前列泰組，另取10隻大鼠背部皮下多點注射生理鹽水，作為空白對照組。造模第2天開始喂藥，10 mL·kg-1，苦豆腎茶方高、低劑量組灌胃苦豆腎茶方（生藥9.0，4.5 g·kg-1），前列泰膠囊組灌胃前列泰（藥粉0.95 g·kg-1），連續給藥8周，ELISA法檢測大鼠前列腺組織ICAM-1，INF-γ，MCP-1含量。結果：模型組大鼠前列腺組織ICAM-1含量較正常大鼠明顯增多（P[1]。苦豆腎茶方有減輕免疫性前列腺炎模型大鼠前列腺組織炎症反應的作用，可減少前列腺腺泡上皮細胞基底膜破壞，抑製炎細胞浸潤，為進一步研究其作用機製，本研究觀察苦豆腎茶方對自身免疫性前列腺炎大鼠前列腺組織中細胞間黏附分子1（intercellular adhesion molecule 1，ICAM-1）、γ幹擾素（interferon，INF-γ） 和單核細胞趨化因子-1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）表達情況的影響，從免疫調節的角度探討苦豆腎茶方治療慢性前列腺炎的作用機製。
1 材料
1.1 動物 清潔級健康雄性Wistar大鼠，體重220～240 g，由中國醫學科學院實驗動物研究所提供，許可證號SCXK（京）2005-0013 。
1.2 藥物與試劑 苦豆腎茶方（方中苦豆子、腎茶、蒲公英水提，延胡索、土茯苓、王不留行、川牛膝醇提，丹參先醇提再水提，北京中醫藥大學臨床中藥學教研室提供，生藥2 g·mL-1）；前列泰膠囊（深圳高卓藥業有限公司，批號060701）；佐劑用卡介苗（中國食品藥品檢定研究院，批號20070716）；Triton X-100（Solarbio）；大鼠ICAM-1，INF-γ，MCP-1 ELISA試劑盒（美國RB公司，批號分別為0803221，0803094，0803220）。
1.3 儀器 MK3酶標儀（芬蘭雷勃公司）；美國RA1000全自動生化儀；LD5-2A離心機（北京醫用離心機製造廠）。
2 方法
2.1 製備抗原 參考文獻報道[2]配製弗氏完全佐劑（FCA）：將液體石蠟與羊毛脂按3∶1比例共熱至70 ℃混勻，高溫滅菌後，按5 g·L-1加入佐劑用卡介苗，無菌乳化後使用。取30隻雄性Wistar大鼠，脫頸椎處死，局部皮膚消毒，下腹正中切口，分離前列腺背葉，剪除多餘脂肪組織及包膜，用冷生理鹽水洗淨，按每克前列腺組織每毫升的比例加入含0.5%Triton X-100的生理鹽水溶液（預先高溫滅菌），在冰水浴上用玻璃勻漿器製成勻漿。將勻漿液3 000 r·min-1離心30 min，取上清液。以雙縮脲法測定勻漿上清液的蛋白含量，以0.1 mol·L-1 pH 7.4的PBS液稀釋前列腺蛋白質量濃度至20 g·L-1。研缽內放入完全弗氏佐劑，將前列腺蛋白液逐步加入FCA中，邊加邊同一方向研磨，使之完全乳化。
2.2 造模與分組 50隻雄性Wistar大鼠，常規飼養1周，隨機分組，每組10隻，即正常對照組、模型對照組、苦豆腎茶方高、低劑量組、前列泰組。將各組動物稱重後，參考文獻報道造模[4]，10%水合氯醛3.5 mL·kg-1體重腹腔注射麻醉，對照組背部皮下多點注射滅菌生理鹽水1 mL，其餘4組動物背部皮下多點注射乳化後的抗原液l mL。第1，28天各注射1次。首次造模後第2天開始喂藥，10 mL·kg-1，苦豆腎茶方高、低劑量組灌胃苦豆腎茶方，分別為生藥9.0，4.5 g·kg-1（分別相當於60 kg成年人臨床日用量的18，9倍），前列泰膠囊組灌胃前列泰，劑量為藥粉0.95 g·kg-1（60 kg成年人臨床日用量的10倍），對照組及模型組灌服等體積蒸餾水，每日1次，連續給藥8周。8周後，10%水合氯醛麻醉，打開腹腔，取前列腺病理檢查，若觀察到前列腺局部組織結構損害，部分基膜被破壞，出現明顯炎性細胞浸潤的慢性炎症病理改變，可判定造模成功，造模成功率86%。取造模成功大鼠部分前列腺組織，每組共8隻，ELISA法檢測ICAM-1，INF-γ，MCP-1。