1 材料與方法
1.1 材料來源
健康7日齡新生Wistar大鼠 112隻，購於佳木斯大學實驗動物中心。納入標準：精神活潑，反應靈敏，體形正常。排除標準：未達到上述年齡標準；精神萎靡，反應遲鈍；有感染及其他不健康症狀；行走不穩。將112隻Wistar大鼠分為三組：假手術組（n=36隻）：手術分離頸總動脈後不結紮，縫合手術切口後，不放入氧倉做低氧處理；缺氧組（n=38隻）：單純做缺氧缺血性腦病（HIBD）模型；HIBD+白藜蘆醇藥物幹預組（n=38隻）：HIBD模型製作後每天腹腔注射2%的RES藥液，按50 μg/g，1次/d。各組分為6 h、24 h、48 h、72 h、5 d和7 d 個時間段進行檢測。
1.2方法
1.2.1 建立HIE動物模型 取新生7日齡Wistar大鼠。取頸正中1 cm左右縱形切口，在左側胸鎖乳突肌深麵與氣管之間找到並遊離左側頸總動脈，暴露左頸總動脈，用5-0號絲線結紮雙線結紮後剪斷左側頸總動脈。以（1～2）L/min的速度，持續輸入含8%氧氣和92%氮氣的混合氣體，以CY-12C測氧儀監控氧濃度為（8±0.5）%，低氧2 h後將新生鼠取出，返回母鼠身邊繼續喂哺以備用。同時假手術組（僅做頸正中切口，遊離左側頸總動脈，但不結紮）亦不做低氧處理。
1.2.2 藥物配製及幹預治療 無菌操作下先用醫用酒精溶解RES，再用生理鹽水稀釋濃度為2%的溶液，-20℃冰箱保存。造模成功後藥物幹預組乳鼠按50 μg/g，腹腔注射給藥，1次/d。缺氧組乳鼠則同時給予上述標準等量生理鹽水腹腔注射。至各不同時間點處死取材。
1.2.3 取材及切片的製作 三組大鼠分別於缺氧缺血後6 h、12 h、24 h、72 h、5 d和7 d處死。斷頭取腦，以視交叉為切點，冠狀位向後取一片約厚3 mm組織。標本按常規給予甲醛固定。用石蠟切片機做連續冠狀切片，置於經多聚-L-賴氨酸處理的防脫載玻片上，片厚5 μm。
1.2.4 免疫組織化學染色檢測MMP-9、TIMP-1的表達 選用SP即用型免疫組化試劑盒進行免疫染色，DAB顯色。所有步驟參照試劑盒說明書進行。設置對照：取相同量的PBS代替一抗MMP-9和TIMP-l，其餘步驟同前。
1.3 陽性細胞的判斷[4]
MMP-9、TIMP-1陽性著色表現為胞漿染成淺黃色棕黃色或棕褐色。采用陽性細胞計數法，每張切片在400倍物鏡下分別隨機選取不重複的6個視野，計數MMP-9、TIMP-1陽性細胞數，取平均值，以均數±標準差表示。
1.4 統計學處理
應用SPSS12.0統計學軟件對數據進行分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，組間比較使用t檢驗或進行方差分析。P
2結果
HIBD組的MMP-9水平、TIMP-1水平治療6 h、24 h、48 h、72 h、5 d、7 d分別顯著高於假手術組，但經RES幹預後，HIBD+RES組的MMP-9水平顯著低於HIBD組（P
3討論
MMPs是降解ECM、同時又是阻止ECM對血管內皮細胞修複作用的主要蛋白酶，參與胚胎正常發育及組織重塑，並在多種病理過程中發揮作用[5]。近研究表明，腦缺氧缺血後出現MMP-9的合成上調，MMP-9與BBB的破壞、繼發性炎性反應和VBE等密切相關[6]。研究顯示[7]在局灶性腦缺血再灌注小白鼠模型實驗中發現，活化的MMP-9的早期出現導致BBB破壞和VBE。而MMPs的表達可經多種機製調控發生：轉錄水平、酶原激活水平和TIMPs的調節。
TIMP-1由巨嗜細胞、角質生產細胞、成纖維細胞、平滑肌細胞和內皮細胞合成，能抑製絕大多數MMPs，己經證實TIMP-1優先與MMP-9特異性結合，形成可溶性非共價複合物而發揮其抑製作用[8]。且研究發現，TIMPs不僅是MMPs的抑製劑，可能還在MMPs的激活級聯過程中扮演重要角色[9]。
國內對於MMP-9、TIMP-1在參與缺血性腦血管病變後BBB損害、VBE的形成過程中的變化規律及相互關係研究甚少；對於MMP-9在腦缺血再灌注損傷過程中其非特異性抑製劑幹預方麵的研究文獻也很少見。