2.3 ELISA法檢測細胞分泌炎症因子IL-23 HaCaT細胞接種於培養瓶，實驗分組同2.2項，每組設6個平行孔。細胞與藥物共同作用24 h。實驗結束後，分別吸取培養上清，3 000 r·min-1離心10 min，采用ELISA法檢測細胞分泌的IL-23，操作按試劑盒說明進行。
2.4 Real-time PCR法檢測細胞因子CXCL1，CXCL2，CCL20，DEFB4 mRNA的表達 實驗分組同2.2項，每組設3個平行孔。TRIzol法提取總RNA，生物分光光度計測定RNA含量，瓊脂糖凝膠電泳顯示清晰的18S和28S RNA熒光條帶。將RNA反轉錄成cDNA，用UltraSYBR Mixture進行擴增。反應條件：95 ℃預變性10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，45個循環。實驗結果以Ct值反映基因含量，采用2-ΔΔCt相對定量法進行組間比較。
2.5 統計方法 用SPSS 15.0分析軟件進行統計，實驗數據以±s表示。采用單因素方差分析（One-way ANOVA）進行組間差異性比較，P
3 結果
3.1 紫草素對HaCaT細胞增殖的影響 IL-17A 200 μg·L-1作用於HaCaT細胞，能促進細胞明顯增殖（P
3.2 紫草素對HaCaT細胞分泌炎症因子IL-23的影響 HaCaT細胞在IL-17A刺激下分泌IL-23明顯增加（P
3.3 紫草素對HaCaT細胞內趨化因子基因表達的影響 與模型組相比，空白組各項指標均明顯降低，即IL-17A刺激HaCaT細胞可使CXCL1，CXCL2，CCL20，DEFB4 mRNA表達明顯增加。紫草素高劑量組的比值均低於模型組，分別為0.36，0.40，0.08，0.43，而紫草素低劑量組對各項指標mRNA也呈現一定的抑製作用（CXCL1除外）。
4 討論
銀屑病是一種反複發作的自身免疫性皮膚病，主要表現為表皮細胞過度增殖和活化T淋巴細胞、中性粒細胞和樹突細胞的真皮浸潤。浸潤的銀屑病皮損病理學檢查可見CD4+T細胞亞群Th1，Th17，Th22和CD8+亞群Tc17和Tc22顯著增加，這些細胞亞群通過一係列炎症因子產生炎症反應是銀屑病的發病基礎[6]。IL-17A是在Th17細胞分泌的主要效應細胞因子，對角質形成細胞的基因表達具有直接的調控作用，包括先天免疫防禦和調節一係列細胞趨化因子[7]。IL-23來源於抗原提呈細胞，是Th17細胞的激活和存活所必需的，IL-23/Th17軸在銀屑病發病機製中具有重要作用[8]。此外，IL-23也可由角質形成細胞過度分泌，可進一步刺激Th17細胞分泌相關細胞因子[9]。
趨化因子是由多種細胞分泌的具有可引起白細胞趨化特性的細胞因子，趨化因子除了趨化及激活白細胞外，還具有刺激細胞增殖、促進新生血管形成等多方麵的生物學活性，在炎症性皮膚病的致病機製中發揮重要作用。現已有報道，多種趨化因子存在於銀屑病發生發展過程：①CXCL1，即生長相關基因-α/黑素瘤生長刺激活性（GRO-α/MGSA）在銀屑病皮損的鱗屑具有生物學活性，可由角質形成細胞、成纖維細胞、內皮細胞、單核細胞等產生，具有趨化中性粒細胞的活性[10]；②CXCL2，即單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）或單核細胞趨化及激活因子（MCAF），具有趨化單核細胞、T細胞、嗜堿性粒細胞的活性；③CCL20，即巨噬細胞炎性蛋白-3α（MIP-3α），來源於角質形成細胞、成纖維細胞、微血管內皮細胞核樹突狀細胞，其受體為CCR6，IL-17可以誘導CCL20的產生，CCL20/CCR6在銀屑病中顯著上調，並發現表達CCL20的角質形成細胞與浸潤銀屑病皮損的T細胞定位一致；銀屑病患者歸巢皮膚的CLA+記憶型T細胞表麵及外周血單個核細胞CCR6 mRNA的表達水平皆顯著升高[11]。趨化因子及受體在銀屑病病理發生機製的研究，可以從藥物幹預炎症反應方麵，對銀屑病的治療提供依據和新的思路。
紫草素的藥理作用極為廣泛，包括抗炎、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化損傷、保護肝髒、抑製細胞凋亡、抑製子宮內膜異位症等。紫草素或紫草為主的複方製劑對銀屑病的治療作用也有相關報道：紫草素能夠通過抑製HaCaT細胞向S期和G2/M期轉化，使細胞生長增殖停滯在G0/G1期[12]；紫草素對IL-17刺激角質細胞分泌VEGF，IL-6及IL-23有抑製作用[13]。
實驗結果表明，IL-17A刺激HaCaT細胞能夠引起DEFB4的高表達，DEFB4為已知銀屑病患者皮損中高度表達的基因[14]，證明IL-17A誘導HaCaT細胞模型與銀屑病表型相類似，而紫草素對升高的DEFB4表達有明顯的抑製作用，說明紫草素對銀屑病可能具有直接的治療作用；紫草素能夠抑製IL-17A誘導的HaCaT細胞增殖以及IL-23的分泌，證實紫草素對於銀屑病的治療作用是通過IL-23/Th17軸，這與之前文獻報道相一致；同時，紫草素對HaCaT細胞內趨化因子CXCL1，CXCL2，CCL20具有明顯的抑製作用，表明紫草素能夠通過抑製趨化因子的產生來抑製T細胞和中性粒細胞的募集，從而達到治療銀屑病的目的。但對於T淋巴細胞、角質形成細胞和中性粒細胞之間的趨化因子及相關受體的關係，需要以不同細胞為靶點進一步的深入研究。