紫草素對IL—17誘導角質形成細胞增殖及趨化因子表達的影響
藥理
作者：解欣然等
[摘要] 目的：觀察紫草素（shikonin）對IL-17誘導人角質形成細胞增殖及其分泌趨化因子的影響，探討紫草素治療銀屑病的作用機製。方法：采用IL-17A（200 μg·L-1）刺激體外培養的HaCaT 細胞，同時加入不同濃度紫草素（2，1mg·L-1）共同作用24 h。CCK-8法測定細胞增殖；ELISA法測定細胞分泌炎症因子IL-23；Real-time PCR法測定細胞內趨化因子CXCL1，CXCL2和CCL20以及β-防禦素4（β-defensin4，DEFB4）的表達。結果：紫草素2，1 mg·L-1能顯著抑製IL-17A誘導的HaCaT細胞增殖，具有統計學意義（P
[關鍵詞] 紫草素；IL-17；HaCaT細胞；趨化因子；銀屑病
[Abstract] Objective： To observe the effect of shikonin on the proliferation of human keratinocytes induced by IL-17 and secretion of chemokines， in order to discuss the mechanism of Shikonin in the treatment of psoriasis. Method： In vitro cultured HaCaT cells were stimulated by IL-17A （200 μg·L-1） and mixed with different concentrations （2， 1 mg·L-1） of shikonin for 24 hours. The cell proliferation was detected by CCK-8 assay. Cell secretion inflammatory factor interleukin-23 （IL-23） was detected by ELISA. The expressions of intracellular chemokines CXCL1， CXCL2， CCL20 and β-defensin 4 （DEFB4） were detected by Real-time PCR. Result： Shikonin （2，1 mg·L-1） could distinctly inhibit HaCaT cell proliferation induced by IL-17A， with statistical difference （P
[Key words] shikonin； IL-17A； HaCaT cell； chemokine； psoriasis
銀屑病（psoriasis）是一種免疫性皮膚病，以表皮過度增殖、慢性炎症和T淋巴細胞浸潤為主要特征。目前，IL-23/Th17軸被認為是銀屑病發生的重要環節。Th17細胞分泌的主要效應細胞因子即IL-17，能夠募集中性粒細胞和參與炎症反應，在銀屑病患者皮損呈陽性表達[1-3]。紫草素是清熱涼血中藥紫草的主要有效成分，紫草是治療銀屑病的常用中藥之一。已有文獻報道紫草素抑製角質形成細胞增殖的作用[4-5]。本研究通過建立IL-17A誘導HaCaT細胞增殖模型，觀察紫草素對細胞增殖和分泌趨化因子的影響，嚐試從炎症方麵探討紫草素治療銀屑病的可能作用機製。
1 材料
1.1 細胞 HaCaT細胞株（人永生化表皮細胞），購於中國醫學科學院基礎醫學研究所協和細胞資源中心。
1.2 藥物和試劑 紫草素購於食品藥品檢定研究院；MEM培養液、胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶（0.25%）（Gibco公司）；白介素-17A（IL-17A，PeproTech公司）；白介素-23（IL-23）ELISA試劑盒（eBioscience公司）；PCR引物由上海生物工程有限公司合成；cDNA第一鏈合成試劑盒，RealSuper Mixture（北京康為世紀生物科技有限公司）。
1.3 儀器 全波長酶標儀（美國Thermo公司）；3-18K離心機（美國Sigma公司）；倒置顯微鏡（日本Olympus公司）；流式細胞儀（美國BD公司）；ABI7500熒光定量PCR儀（美國應用生物係統公司）。
2 方法
2.1 細胞培養 HaCaT細胞用含10% FBS，青黴素100 U·mL-1、鏈黴素100 U·mL-1的MEM培養液，在 37 ℃，5%CO2，飽和濕度條件下培養。將HaCaT細胞以1×105個/mL接種於細胞培養板（瓶），細胞融合近80%進行實驗。
2.2 CCK-8法測定細胞增殖 HaCaT細胞接種於96孔板，實驗分組如下：空白組（無血清培養液）、模型組（IL-17A，200 μg·L-1）、紫草素高、低劑量組（2，1 mg·L-1+ IL-17A 200 μg·L-1），每組設8個平行孔。細胞與藥物共同作用24 h後，進行指標檢測。實驗結束後，棄去培養上清，加入100 μL培養液和10 μL CCK-8溶液，孵育2 h後在酶標儀450 nm處檢測吸光度A。