3.1.2 過膜壓力對粒子粒徑分布的影響 為了製備納米級粒子，本文選擇1 μm膜在不同過膜壓力下製備PLGA納米粒。快速膜乳化主要通過較高的壓力使液滴與膜孔發生碰撞，使較大乳滴破碎成粒徑更小、更均一的小乳滴，因此過膜壓力對納米粒粒徑及其均一性有較大影響。不同過膜壓力下製備粒子的粒徑分布和掃描電鏡圖。900，1 000，1 150 kPa下所得納米粒的平均粒徑分別為 432.6，395.1，335.5 nm，PDI分別為0.103，0.072，0.012。當過膜壓力為900 kPa時，預乳液在膜孔中受到的剪切力較小，不足以使乳滴破碎成更小的液滴，乳滴或變形通過或破碎通過，因此，最終形成的乳滴粒徑較大且不均一；當過膜壓力為 1 150 kPa時，納米粒粒徑分布均一性最好。
3.1.3 過膜次數對納米粒徑分布的影響 在相同過膜壓力下，過膜次數是影響 PLGA納米粒粒徑及PDI的主要因素。過膜壓力 1 150 MPa、不同過膜次數下（1，2，3）製備的 PLGA 納米粒的粒徑分布和掃描電鏡圖，過3次膜後，納米粒粒徑基本均一。
3.1.4 水相中PVA濃度對納米粒粒徑的影響 以PVA 質量濃度分別為 5，10，20 g·L-1製備PLGA 納米粒，其粒徑分布，納米粒平均粒徑分別為344.5，343.7，326.1 nm，PDI分別為0.084，0.037，0.011。表明隨PVA濃度增加，納米粒平均粒徑減小，均一性變好。可能由於PVA濃度增加，油水界麵張力會降低，單位壓力下膜剪切力相應增大，導致粒徑減小，乳液液滴在過膜前後發生聚合的幾率減小，乳液能保持較好的均一性，最終得到粒徑分布較窄的PLGA納米粒；若進一步增加PVA濃度，則乳液起泡嚴重，造成納米粒洗滌困難，同時對後續離心條件要求也苛刻，故選擇PVA質量濃度為20 g·L-1。
3.1.5 油水體積比對納米粒粒徑的影響 快速膜乳化製備納米粒過程中，油/水相體積比影響預乳液的黏度，繼而影響其破碎成均一乳液的程度。不同油/水相體積比條件下所製備PLGA納米粒的粒徑分。油/水相體積比分別為1∶5，1∶7.5，1∶10 時所製備PLGA納米粒的平均粒徑分別為332.6，430.0，546.2 nm，PDI分別為 0.010，0.142，0.350。結果表明，隨油/水相體積比增大，納米粒粒徑均一性變好。
3.2 不同方法所製PLGA納米粒的均一性比較
分別采用常用的二元溶劑分散法、超聲乳化法製備納米粒與快速膜乳化法進行對比，3種方法所製備PLGA納米粒的掃描電鏡圖。其對應的平均粒徑分別為290.6，207.1，332.6 nm，PDI分別為0.112，0.173，0.010，通過比較可看出快速膜乳化法所製PLGA納米粒粒徑均一性較好，而二元溶劑分散法和超聲法所製PLGA納米粒粒徑分布相對較寬。作為藥物載體，較寬的粒徑分布會造成批次間重複性差。與前2種納米粒製備方法相比，快速膜乳化法所製PLGA納米粒粒徑均一可控，有望克服現有方法的不足。
3.3 微球載藥模擬研究
掃描電鏡可見微球大小均一，表麵光滑無粘連現象，包載尼羅紅微球Z軸方向某一切麵圖顯示，熒光物質尼羅紅均勻分散於切麵圓之中，熒光強度較強。Z軸方向從上到下不同位置切麵圖，其經計算機處理而得圖10c，X-Y軸切麵為圓形，而Y-Z，X-Z軸由於掃描層數有限疊加而成橢圓形，從而說明熒光物質均勻分布於微球之中。
3.4 納米粒體內靶向性研究
包載DiR納米粒在給藥後，開始幾分鍾內雖然全身均有熒光分布，但肝部熒光強度明顯強於DiR對照組，DiR對照組在尾靜脈注射後全身均有熒光分布，肝髒部位熒光較其他部位略強；在給藥20 min後，DiR納米粒組即可大部分濃集於肝、脾部，其他部位幾乎無熒光現象，顯示出較強的肝、脾靶向性；給藥3 h後，從DiR對照組內髒解剖圖可見除了肝、脾中有熒光外，在肺中也有一定分布，3 h活體成像和內髒解剖圖顯示，DiR納米粒組隻有肝、脾中有熒光，其他髒器基本無熒光分布，且強度明顯強於DiR對照組，說明納米粒組經尾靜脈給藥後，可大部分富集於肝、脾組織。
4 討論
製備納米級PLGA粒子的常用方法有探頭超聲法、納米沉澱法（又稱自乳化溶劑分散技術）、高壓均質法等。本實驗采用快速膜乳化法製備PLGA納米粒，可以通過調節膜孔徑和過膜壓力等因素，得到相應大小的粒子，小到幾百納米，大致幾十微米。與其他方法相比，該方法製備的粒子粒徑更易控製、分布更為均一。當然，若要獲得更小的納米級粒子，則需要更小孔徑的膜，更大的操作壓力，這對膜和設備的要求也更苛刻，這可能是目前為止尚未出現利用快速膜（SPG膜）乳法製備200 nm以下粒子的原因。
目前有關 PLGA 納米粒、微球靶向性研究較多，其內部結構和藥物在其中分布研究較少，因為常用方法如光學顯微鏡、掃描電子顯微鏡和透射電鏡難以看到粒子的內部結構，不能提供微球構成的信
a. 7 min DiR納米粒組；b. 20 min DiR納米粒組；c. 3 h DiR納米粒組；d. 7 min熒光染料DiR對照組；e. 20 min熒光染料DiR對照組；f. 3 h熒光染料DiR對照組；g. 3 h內髒解剖（左納米粒組、右熒光染料對照組）。
激光共聚焦可使焦平麵外結構的散射光減到最低，提高呈像質量，實現對較厚樣品的光學切麵和三維重組[20]，並可通過不同的熒光標記物識別微球表麵及內部結構[21-22]。但是共聚焦的本質還是熒光顯微鏡，無法突破光學顯微鏡的極限，無法對隻有幾百納米的粒子進行觀察，因此，本實驗用10 μm膜代替1 μm膜製備粒子，以便於用激光共聚焦直接觀察。就本文而言，熒光物質均勻分布於PLGA微球中，結合掃描電鏡可以推測微球為實心圓球，但仍需進一步實驗驗證；不同理化性質的熒光物質在PLGA中分布可能有所不同，有時可能不在儀器檢測限和靈敏度檢測範圍之內；微球和納米粒性質有所不同，即使原理和方法相同，就單個粒子中熒光物質分布而言，納米粒是否是微球的簡單放大，還需實驗進一步研究。
小動物活體成像研究中，將包載熒光染料的微粒置於小動物活體成像係統下直接觀察時，熒光強度較弱，但將其靜脈注射後，雖然其濃度被稀釋了，但熒光強度卻有所增加，可能是因為DiR作為一種脂溶性染料，當其進入體內脂溶性介質中時反而顯示出較強的熒光。
一般認為納米粒的被動靶向是納米粒-藥物複合體被肝Kupffer細胞捕捉吞噬，通過正常生理過程運送至肝、脾等組織，通過被動靶向即自然靶向實現肝靶向[23]。本實驗製備納米粒的平均粒徑為332.6 nm，小動物活體成像研究表明，其具有較好的肝、脾靶向性。楊安樹[24]通過體外實驗研究納米粒粒徑對巨噬細胞吞噬的影響時，發現納米粒經血清調理後，隨粒徑增大，巨噬細胞對納米粒的吞噬率逐漸升高，粒徑為400 nm左右時，吞噬率最高，粒徑大於400 nm時，變化不明顯。對於肝髒疾病，藥物包載於載體中，可發揮靶向、高效和低毒等優勢，將在今後肝、脾等疾病的診斷和治療中發揮越來越重要的作用。
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