2.1.3供試品溶液的製備精密稱定阿薩伊油1g，置於100mL具塞錐形瓶中，加入1%硫酸乙醇溶液30mL，搖勻，85℃水浴回流3h。放冷至室溫，加入2mol·L-1氫氧化鈉乙醇溶液30mL，搖勻，85℃水浴回流2h。放冷至室溫，加入飽和氯化鈉水溶液30mL，搖勻，轉移至分液漏鬥中，石油醚萃取3次，每次40mL。合並石油醚層，水洗至中性。石油醚層減壓回收溶劑至幹，加流動相溶解並定容至5mL量瓶。經0.45μm微孔濾膜過濾，取續濾液即得。
2.1.4線性關係的考察分別精密吸取對照品溶液3，4，5，6，8，10，15，20，25μL注入液相色譜儀，以ln（進樣量）為橫坐標，ln（峰麵積）為縱坐標，繪製標準曲線。回歸方程為Y=1.639X+0.7027（r=0.9992）。結果表明β-穀甾醇在0.766～6.38μg線性關係良好。
2.1.5檢測限、定量限分別精密吸取對照品溶液一定體積進樣分析，確定β-穀甾醇檢測限為0.26μg（S/N=3），定量限為0.51μg（S/N=10）。
2.1.6精密度試驗精密吸取同一供試品溶液10μL，連續進樣6次，記錄色譜峰的峰麵積，結果β-穀甾醇、總甾醇峰麵積的RSD分別為2.8%，2.9%，表明儀器精密度良好。
2.1.7穩定性試驗取同一樣品溶液，分別在0，1，2，3，4，5，6，8，10，12，24h分別進樣依法測定其峰麵積。β-穀甾醇、總甾醇峰麵積的RSD分別為2.3%，2.4%，表明供試品溶液穩定性良好。
2.1.8重複性試驗取同一批（批次1）阿薩伊油樣品6份，按供試品方法製備，分別依法測定。β-穀甾醇、總甾醇含量的RSD分別為2.8%，2.9%，表明本方法重複性良好。
2.1.9加樣回收試驗精密稱取已知含量的樣品（批次1）約0.5g共6份，分別加入同一濃度的對照品溶液（0.97g·L-1）1mL，按供試品溶液製備方法製備，依法測定，加樣回收率符合要求，見表1。
2.1.10樣品的測定取3批阿薩伊凍幹粉製備阿薩伊油，按供試品方法製備，分別依法測定。阿薩伊油中β-穀甾醇的質量分數為1.85mg·g-1（0.185%），總甾醇質量分數為1.93mg·g-1（0.193%）。阿薩伊凍幹粉中β-穀甾醇平均質量分數為0.83mg·g-1（0.083%），總甾醇質量分數（以β-穀甾醇計）為0.88mg·g-1（0.088%）。
2.2總氧自由基清除能力法（TOSC）測定阿薩伊油的抗氧化活性
2.2.1TOSC測定待測樣品TOSC的計算公式為TOSC=100-（∫AS/∫AC）×100。式中∫AS，∫AC分別為樣品（有外加抗氧化劑）和對照（無外加抗氧化劑）反應係統中產生的乙烯量（以峰麵積表示）。當樣品無抗氧化能力時，樣品和對照中乙烯的峰麵積相同，∫AS/∫AC=1，TOSC=0;相反，當樣品抗氧化能力很強時，∫AS趨於0，此時TOSC接近100。
2.2.2氣相色譜條件HP-1毛細管色譜柱（0.32mm×30m×0.25μm），載氣氮氣;進樣口溫度160℃，分流比2∶1;頂空條件：平衡溫度50℃，定量環溫度60℃，傳輸線溫度70℃，平衡時間0min，進樣體積1mL，進樣時間1min;柱流速1.0mL·min-1;檢測器FID，檢測器溫度220℃
2.2.3對照溶液的製備取還原型穀胱甘肽適量，精密稱定，加PBS溶解製成每1mL含GSH 20g·L-1對照溶液。取對照溶液，加PBS，逐級稀釋製成0.1，0.5，1，2，4，6，8，10g·L-1係列濃度對照溶液。
2.2.4供試品溶液的製備取阿薩伊油適量，精密稱定，先用少量的乙醇溶解，再用PBS超聲分散，製成每1mL含PEE 20g·L-1供試品溶液。取供試品溶液，加PBS逐級稀釋製成0.1，0.5，1，2，4，6，8，10g·L-1係列濃度供試品溶液。
2.2.5TOSC測定步驟在10mL頂空瓶內分別先後加入0.25mmol·L-1的KMBA0.8mL（0.1mol·L-1磷酸鉀緩衝液配製，pH7.4），供試品溶液0.1mL（對照中加入0.1mL磷酸鉀緩衝液），0.2mol·L-1的ABAP0.1mL，最終頂空瓶內的反應係統體積為1mL，加蓋密封後搖勻。置於35℃水浴中恒溫振蕩1h，立即放入頂空進樣器中，進樣體積1mL進樣分析。經乙烯標準氣進樣分析，指認乙烯色譜峰位置。結果見圖2，3。
3討論
3.1植物甾醇類成分的含量測定
3.1.1樣品前處理方法的選擇植物甾醇常以遊離態和結合態存在，結合態的甾醇主要以糖苷和羧
1.乙烯。
酸酯的形式存在。因此，進樣分析前應先進行酸水解，使以糖苷形式存在的甾醇遊離;然後再經皂化使以羧酸酯形式存在的甾醇遊離;由於植物甾醇常與油脂共存，經皂化使油脂生成可溶於水的鈉皂或鉀皂，而與不溶於水的甾醇分離[9];石油醚萃取甾醇的過程中，皂化液中加入飽和氯化鈉溶液可鹽析出大量白色皂化物，有利於石油醚萃取液澄清。本研究先後對水解液酸濃度（0.5%，1%，2%硫酸乙醇），酸水解時間（1，2，3，4h），皂化液堿濃度（1，2，3mol·L-1），皂化時間（1，2，3h），鹽析用飽和氯化鈉溶液的用量，萃取溶劑用量和次數進行了考察。