阿薩伊油中β—穀甾醇及總甾醇含量測定和抗氧化活性研究
製劑與炮製
作者：賀成 李偉 張建軍 屈勝勝 李佳靜 王林元
[摘要]建立阿薩伊油中甾醇類成分的含量測定方法，並對阿薩伊油的抗氧化活性進行評價。采用高效液相色譜法建立了阿薩伊油中β-穀甾醇、總甾醇（β-穀甾醇、豆甾醇之和，以β-穀甾醇計）的含量測定方法。采用Purosper STAR LP C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，以乙腈-異丙醇（30∶70）為流動相，流速1mL·min-1，柱溫為室溫，蒸發光散射檢測器漂移管溫度70℃，霧化器流速2.0L·min-1。結果表明β-穀甾醇在0.766～6.38μg線性關係良好，回歸方程為Y=1.639X+0.7027（r=0.9992），平均加樣回收率為95.7%（RSD2.8%）。阿薩伊油中β-穀甾醇的質量分數為1.85mg·g-1，總甾醇的質量分數為1.93mg·g-1。同時采用總氧自由基清除能力（TOSC）法對阿薩伊油的抗氧化活性進行評價，結果表明樣品具有顯著的抗氧化能力，樣品濃度和抗氧化能力具有較好的劑量-效應關係。
[關鍵詞]阿薩伊;高效液相色譜法;β-穀甾醇;抗氧化劑;總氧自由基清除能力
[收稿日期]2014-09-30
[通信作者]王林元，碩士，副教授，Tel：（010）64287912，E-mail：[email protected]
[作者簡介]賀成，碩士，助理實驗師，E-mail：[email protected]
Euterpe oleracea Mart是南美洲亞馬遜河及其支流流域特有的一種大型棕櫚樹，它的果實被稱作阿薩伊，又稱巴西莓（acai），是一種南美洲傳統草藥，其果肉、果皮、種子以及果油皆可藥用[1]。目前，阿薩伊因較強的抗氧化能力和可作為功能性食品而備受關注。有文獻報道，阿薩伊作為一種天然抗氧化劑的新資源，深紫色的成熟果實富含花青素，但研究數據表明花青素對阿薩伊總體抗氧化能力的貢獻大約隻有10%，顯然阿薩伊中存在具有抗氧化能力的未被識別的成分[2-3];對阿薩伊其他類成分的抗氧化活性研究未見報道。本研究進一步對阿薩伊中含量較多的油類成分進行分析，並研究其抗氧化活性。采用阿薩伊果實凍幹粉製備阿薩伊油，選擇其中具有抗氧化、抗癌、抗炎和降脂活性[4-5]的植物甾醇類成分進行分析並對阿薩伊油的抗氧化活性進行評價。
評價成分體外抗氧化能力的方法很多[6-7]，但大都不能反映機體總體抗氧化能力。總氧自由基清除能力（total oxyradical scavenging capacity，TOSC）法是以頂空氣相色譜法（headspace gas chromatography，HS-GC）為手段的以評價組分中任何可與氧自由基結合物質的抗氧化能力的指標，本文采用了TOSC法對阿薩伊油整體抗氧化活性進行了研究。
1材料
Agilent1100高效液相色譜儀（二極管陣列檢測器，Alltech2000蒸發光散射檢測器），Agilent6890N氣相色譜儀（7694E Headspace Sampler頂空進樣器，氫火焰離子化檢測器），頂空進樣瓶（安捷倫公司，10mL）;SHZ-88台式水浴恒溫振蕩器（江蘇太倉實驗設備廠）。
甲醇（色譜純，Fisher Scientific）;乙腈（色譜純，Fisher Scientific）;異丙醇（色譜純，Fisher Scientific）;4-甲硫基-2-氧丁酸鈉（KMBA，Sigma）;2，2′-偶氮二異丁基脒二鹽酸鹽（ABAP，Sigma）;還原型穀胱甘肽（GSH，Sigma）;乙烯標準氣體（純度>99.9%，北京氧利來公司）;磷酸二氫鉀，磷酸氫二鉀，氫氧化鈉，無水乙醇，三氯甲烷，濃硫酸（分析純，國藥試劑公司）;β-穀甾醇（純度>98%），豆甾醇（純度>95%）購自上海詩丹德生物技術有限公司。
阿薩伊凍幹粉產於巴西帕拉州的阿薩伊，果實經過挑選、清洗、軟化後，加水旋轉攪拌磨碎，去除果核，過0.5mm篩網後製成果漿，包裝，冷凍儲存。阿薩伊果漿再經冷凍幹燥，製成凍幹粉。阿薩伊果漿購自生產商巴西百利公司（Bela lacá Polpas de Frutas Indústria e Comércio Ltda）。阿薩伊凍幹粉由美國蒙納維公司（MonaVie Inc）提供。
阿薩伊油（Petroleum ether extract，PEE）的製備：稱取阿薩伊凍幹粉，加石油醚索氏提取，旋轉蒸發回收溶劑至無石油醚味。得深綠色油狀液體，冷藏。平行製備3批，平均收率為45.5%。
2方法與結果
2.1β-穀甾醇、總甾醇的含量測定
2.1.1色譜條件和係統適用性試驗Purosper STAR LP C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）;流動相乙腈（A）-異丙醇（B）梯度洗脫，0～25min，30%B;25～26min，30%～90%B;26～40min，90%B。流速1mL·min-1;柱溫室溫;蒸發光散射檢測器漂移管溫度70℃、霧化器流速2.0L·min-1;進樣量10μL。在上述色譜條件下，各成分峰之間分離度良好，理論板數按β-穀甾醇計算應不低於5000。空白溶劑無幹擾。
2.1.2對照品溶液的製備分別取對照品適量，精密稱定，加流動相溶解並稀釋製成每1mL含β-穀甾醇、豆甾醇均約為0.25mg的混合對照品溶液。