《中國藥典》二氧化硫測定法應用於白芍藥材檢測的探討
製劑與炮製
作者：劉歡歡 孔銘 李秀楊 李鬆林
[摘要]為了探討2010年版《中國藥典》第一增補本附錄二氧化硫（SO2）殘留量測定法應用於白芍藥材檢測的可靠性，采用藥典方法測定白芍藥材中SO2殘留量，考察方法的重複性；采用HPLC測定白芍殘渣和蒸餾液中芍藥苷亞硫酸酯的含量，考察芍藥苷亞硫酸酯被鹽酸置換轉化釋放SO2的情況。研究發現藥典方法檢測白芍藥材SO2殘留量時，結果重複性差；SO2殘留檢測達“終點”時，藥材殘渣和蒸餾液中均檢測到芍藥苷亞硫酸酯，說明芍藥苷亞硫酸酯沒有完全被鹽酸置換成亞硫酸釋放SO2。藥典方法不能準確檢測白芍藥材SO2殘留量，有必要進行修訂或建立新的高選擇性檢測方法。
[關鍵詞]二氧化硫殘留；白芍；HPLC；芍藥苷亞硫酸酯
[收稿日期]2014-07-25
[基金項目]國家中醫藥管理局行業專項（201307008-2）；國家高技術研究發展計劃（863）項目（2014AA022204）；中國中醫科學院江蘇分院課題（JSBN1301）
[通信作者]李鬆林，研究員，碩士生導師，主要從事中藥藥效物質基礎、質量控製和新產品研發，Tel：（025）85639640，E-mail
[作者簡介]劉歡歡，碩士研究生，Tel：18351895085，E-mail
硫熏法是部分中藥材傳統加工養護方法之一，具有防蟲、防黴、殺菌和美化藥材外觀的作用[1]。因經濟、方便，在民間被廣泛應用，近年來甚至被濫用[2]。研究表明不合理的硫熏處理可導致藥材活性成分發生轉化[3-4]，SO2（亞硫酸鹽）殘留量過高，不但影響藥材質量，而且存在安全隱患[5-7]。為了監控藥材硫熏情況，2010年版《中國藥典》附錄收載了中藥材及飲片中SO2殘留量測定方法[8]，並在第一增補本對方法進行修訂[9]。其基本原理是將樣品在充滿氮氣的環境中經鹽酸酸化，使殘留亞硫酸鹽被置換生成亞硫酸，亞硫酸再經加熱水解生成SO2，產生的SO2通過氮氣流直接帶入吸收液中，再運用碘和亞硫酸氧化還原反應進行滴定[8-9]。在2010年版《中國藥典》第二增補本中又收載了中藥材及飲片中SO2殘留限量標準，規定山藥、牛膝、粉葛、天冬、天麻、天花粉、白及、白芍、白術和黨參等10種中藥材及其飲片SO2殘留量不得超過400mg·kg-1，其他中藥材及飲片則不得超過150mg·kg-1[10]。
白芍為毛茛科植物芍藥Paeonialactiflora Pall的幹燥根，為常用中藥材，在儲存過程中容易發生色變和蟲蛀等現象，通常采用硫熏法進行加工處理[11]。但研究發現硫熏後白芍中主要活性成分芍藥苷會明顯降低，同時生成新的化合物芍藥苷亞硫酸酯[12-14]。盡管初步研究證明芍藥苷亞硫酸酯無明顯毒性[15]，但其活性和體內藥代動力學行為均與芍藥苷有明顯差異[16-17]。本課題組按照《中國藥典》2010年版第一增補本附錄IXU項下的蒸餾法檢測白芍藥材中的SO2含量[9]，發現實驗結果重複性差。因此本文擬通過考察藥典方法測定白芍中SO2殘留結果的重複性，應用HPLC測定藥材殘渣和蒸餾液中芍藥苷亞硫酸酯的含量，探討藥典方法測定白芍中SO2殘留量的可靠性，為藥典方法的修訂提供科學依據。
1材料
Waters高效液相色譜儀（Alliance2695四元泵、自動進樣係統、柱溫箱、Empower色譜工作站、Waters2996二極管陣列檢測器）；Millipore Milli-Q超純水製備儀（美國）；METTLER1/1萬和1/100萬電子天平（瑞士）；KQ-250E型醫用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；1000mL可調溫電熱套（南通市通州申通電熱器廠）；78-1型磁力加熱攪拌器（江蘇省金壇市榮華儀器製造有限公司）；二氧化硫殘留測定裝置（泰康醫療）；氮氣（純度≥99.999%，南京天澤氣體有限責任公司）。
白芍樣品（JSPACM-K-1-27，JSPACM-K-1-17，JSPACM-K-1-15）購自亳州康美藥材交易中心，芍藥苷亞硫酸酯（paeoni florinsul fonate）對照品（實驗室自製，結構經NMR和MS確證，純度經HPLC分析≥98%）。硫代硫酸鈉滴定液、碘滴定液（0.01mol·L-1，按2010年版《中國藥典》第一增補版附錄XVF方法配製）[9]；澱粉指示液（按2010年版《中國藥典》二部附錄XVE方法配製）[18]；水為超純水；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。
2方法
2.1二氧化硫殘留量測定
按照《中國藥典》2010年版第一增補版附錄IXU中規定用蒸餾法測定藥材或飲片中的亞硫酸鹽（以SO2計）的殘留量。加熱兩頸圓底燒瓶內的溶液至沸，並保持微沸不同時間後開始用碘滴定液（0.01mol·L-1）滴定，至藍色或藍紫色持續30s或2min不完全消褪，並將滴定結果用空白試驗校正。每1mL碘滴定液（0.01mol·L-1）相當於0.6406mg的SO2。