開始被疏遠
回到京城，朝廷重新設置太尉官，周亞夫被正式任命為太尉。五年後，又升任丞相，漢景帝非常器重他，後來景帝要廢太子，丞相周亞夫為此堅決爭辯，但不被采用。景帝因這件事開始疏遠周亞夫。而梁孝王每次入朝，又常常在竇（dòu）太後麵前說周亞夫的壞話。
竇太後有一次對景帝說：“皇後的哥哥王信可以給他封侯。”景帝推辭說：“當初太後您的侄兒和弟弟，先帝都沒有給他們封侯，等到我即位後才剛給他們封皮侯和章武侯。王信現在還不能封侯。”竇太後說：“皇帝所處時代不同，各位皇帝都應按照自己的時代環境來處理事情。當初我哥哥竇長君在世時，始終也沒被封為侯，他死後倒是他的兒子反被封為侯，我對此事感到非常遺憾。皇帝你趕快封王信為侯吧！”景帝回答說：“請讓我跟丞相商議一下這件事。”跟丞相商議時，周亞夫說：“高皇帝曾約定：‘不是姓劉的人不能封王，不是有功的人不能封侯。不遵守這條規定的人，天下人應共同來討伐他。’現在王信是皇後的哥哥，但他沒有什麼功勞。如果封他為侯，就違反了這條規定。”景帝默然不語，放棄了這件事。
後來匈奴王唯徐盧等五人投降漢朝，景帝想要給他們封侯以鼓勵後來者。丞相周亞夫說：“那些人背叛自己的主子來投降陛下，陛下封侯來獎勵他們，那麼以後還怎麼責備大臣中不守節操的人呢？”景帝說：“丞相的意見不能采用。”於是將唯徐盧等人全部封為列侯。周亞夫因此稱病在家，景帝三年，他因病被免去丞相職務。
過了不久，景帝有一次在宮中將條候周亞夫召來，賜給他飯吃。條侯麵前單獨隻放了一大塊沒有切開的肉，也不放筷子。周亞夫心中很不高興。回過頭來讓主管宴席的人去給他取來筷子。景帝看著他笑著說：“這還不足以使你滿意嗎？”周亞夫忙摘下帽子謝罪。景帝站起身。周亞夫趕快匆匆離席而去。景帝看著走出去的條侯，說：“這個恨恨不平的人不會是少主的得力大臣！”
活活被餓死
過了沒多久，周亞夫的兒子為他從造皇室器物的工官那裏買了五百具作殉（xùn）葬品的鎧甲和盾牌。搬取貨物的雇工因條侯的兒子不給工錢而非常痛恨他。雇工知道他偷偷買的皇家器物，因氣憤而上書給皇帝告發了他。這件事牽連到條侯周亞夫。皇帝看到告發的書信，將此給有關官吏審理。官吏根據文書所列罪狀責問條侯，條侯不答對。景帝罵道：“你們審理此案太不中用，我不用你們了。”於是將延尉召來處理這件事。廷尉責問條侯說：“你想要造反嗎？”周亞夫回答說：“我家所買的器物，都不過是殉葬用的東西，怎麼能說是想造反呢？”審問官說：“你即使不在地上造反，看來也要在地下造反。”官吏審訊他越來越緊。剛開始，官吏去逮捕條侯時，條侯想自殺，夫人製止住了他，因此他沒有死成，於是進了延尉的監獄。在監獄裏條候因絕食五天，最後吐血而死。封國被廢除。
一年後，景帝又改封絳侯周勃的另一個兒子周堅為平曲侯，作絳侯的繼承人。他為侯19年去世，諡號為共侯。他的兒子周建德繼承爵位，為侯13年，做了太子太傅。因他獻給皇帝祭祀宗廟用的酎金酎金（zhòu）：諸侯給皇帝的貢金，供祭祀之用。不合標準，元鼎五年，他被牽連有罪，封國被廢除。
周亞夫死後，景帝便封王信為蓋侯。
《史記》作者司馬遷這樣評價周亞夫：周亞夫用兵，軍容威嚴整肅，表現堅毅忍耐，就是戰國的司馬穰（ránɡ）苴（jū）又超出他多少呢？可惜他滿足於自己的才智而不注重學習，嚴守節操卻不夠恭順，最後落個窮困的結局。