虎耳草乙酸乙酯部位高效液相色譜指紋圖譜研究
化學
作者：周美 陳華國 先春 黃誌金 周欣
[摘要] 目的：建立虎耳草藥材的乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜分析方法。
方法：以Diamonsil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相乙腈（A），0.05%磷酸水溶液（B），梯度洗脫，流速1.0 mL·min-1，檢測波長256 nm，柱溫30 ℃。
結果：建立了虎耳草藥材的乙酸乙酯部位指紋圖譜，確定了15 個共有峰，並用對照品指認了7個峰，精密度和重複性實驗中各共有峰相對保留時間RSD均小於3%，11批不同產地虎耳草相似度存在差異。
結論：虎耳草藥材乙酸乙酯部位指紋圖譜的建立為藥材質量控製提供了科學依據。
[關鍵詞]虎耳草； 高效液相色譜； 指紋圖譜
虎耳草Saxifraga stolonifera（L）Meerb.為虎耳草科Saxifragaceade虎耳草屬的全草，收載於《貴州省中藥材民族藥材質量標準》2003 年版，是貴州特色苗藥材，資源豐富，臨床應用廣泛，虎耳草全草入藥，具有疏風解熱[1，2]、除濕通絡、消積止痛、涼血解毒、抑菌消炎[4，5]的功效，除了具有上述功效外，虎耳草還具有很好的抗前列腺癌作用[3，6]，本課題組研究人員采用MTT法，檢測虎耳草不同提取部位對體外PC，3 細胞的增殖抑製作用，結果表明虎耳草乙醇提乙酸乙酯萃取部位，能使細胞大量累積於G1期，進入S期的細胞減少，改變了PC，3細胞的周期分布，對PC，3細胞的生長有顯著的抑製作用。研究表明，一些藥材中某些特定成分具有抑製腫瘤細胞的作用[7]，但是虎耳草抗前列腺癌作為貴州地道藥材的新用途，其質量控製方麵的研究非常薄弱，嚴重影響了其深度開發與利用，因此值得深入開發研究。本實驗對貴州不同產地的11批虎耳草藥材進行了考察，建立虎耳草乙醇提乙酸乙酯部位的HPLC指紋圖譜，為虎耳草活性物質的質量標準研究提供了科學依據。
1 材料
Dionex Ultimate 3000 高效液相色譜儀（包括四元泵，在線脫氣機，自動進樣器，二極管陣列檢測器，柱溫箱） ；電子分析天平（AL204，梅特勒，托利多） ；DFY，200 高速萬能粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司） ；真空幹燥箱（DZF，6020，杭州藍天化驗儀器廠） ；電熱恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司） ；超聲波清洗器（KQ5200 E，昆山市超聲儀器有限公司） ；電熱鼓風幹燥箱（101，2 AB 型，天津市泰斯特儀器有限公司） ；EM，202 MS1 微波真空幹燥機（合肥榮事達三洋電器股份有限責任公司）。
岩白菜素對照品 （批號，）， 槲皮素對照品 （批號，）， 沒食子酸對照品 （批號，）均由中國食品藥品檢定研究院提供；對香豆酸對照品 （批號gzdd，0312，），原兒茶酸對照品 （批號gzdd，0773，）均由貴州迪大生物有限公司提供；槲皮素，5，O，β，D，吡喃葡萄糖苷 （H，15），槲皮素，3，O，β，L，鼠李糖苷 （H，20）均由實驗室製備，經紫外、紅外、核磁共振波譜及質譜鑒定，純度均大於98%。乙腈為色譜純。甲醇、乙醇、磷酸、乙酸乙酯均為分析純，水為蒸餾水。液相用水為超純水。
虎耳草藥材課題組采收或購買信息，經貴州師範大學陳華國副研究員鑒定，係虎耳草S. stolonifera。自然晾幹後，除去雜質，粉碎備用。
表1 虎耳草藥材采集信息表
Table 1 Sample information table of Saxifraga stolonifera
2 方法與結果
2.1 色譜條件
Diamonsil C18色譜柱 （4.6 mm ×250 mm， 5 μm） ；流動相乙腈（A），0.05%磷酸水溶液（B），梯度洗脫，0～8 min， 90%～90%B；8～10 min， 90%～85%B；10～23 min， 85%～85%B；23～25 min， 85%～82%B；25～43 min， 82%～80%B； 43～70 min， 80%～65%B； 70～90 min， 65%～35%B； 90～105 min， 35%～35%B；105～112 min， 35%～20%B；112～122 min， 20%～4%B；122～130 min， 4%～4%B； 檢測波長256 nm ； 柱溫30 ℃； 進樣量10 μL； 流速1.0 mL·min-1。
2.2 溶液的製備
2.2.1 供試品溶液製備 取藥材粉末2.0 g，精密稱定，置於150 mL 具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇24 mL，於80 ℃水浴回流提取 2.0 h，濾過，濃縮揮幹，殘渣用20 mL 水分散，再用乙酸乙酯30 mL/次萃取5 次，合並乙酸乙酯部分，濃縮揮幹，用甲醇溶解定容於10 mL量瓶中，搖勻，過0.45 μm 微孔濾膜，取續濾液作為供試品溶液。
2.2.2 混合對照品溶液製備 精密稱取沒食子酸酸0.23 mg，原兒茶酸0.32 mg，岩白菜素0.26 mg，對香豆酸0.25 mg，H，15 0.22 mg，H，20 0.44 mg，槲皮素0.26 mg，置10 mL量瓶中，甲醇溶解定容，超聲，搖勻得到。