無患子皂苷對自發性高血壓大鼠AngⅡ/p38MAPK 通路介導的炎症反應與心肌肥厚的影響
藥理
作者：陳明 陳誌武 龍子江 劉金林 高華武 王雅娟
[摘要] 目的：通過觀察無患子皂苷對AngⅡ/p38MAPK通路介導的自發性高血壓大鼠炎症反應的影響，以論證高血壓心肌肥厚與炎症因素的相關性。
方法：取16周齡SHR 32隻，隨機均分為4組，即SHR模型組、陽性對照組（卡托普利，27 mg·kg-1）、無患子皂苷低、高劑量組（27，108 mg·kg-1），另取8隻健康WKY大鼠作為正常對照組，按劑量連續給藥8周，檢測指標如下：①左心室質量指數（LVMI）的測定；②ELISA法檢測心肌勻漿AngⅡ，hs，CRP的含量；③免疫組化法檢測心肌組織AT1R，VEGF的蛋白表達；④Western blot法檢測心肌p，p38MAPK的蛋白表達。
結果：無患子皂苷可抑製AngⅡ在心肌局部含量，減少AT1R以及p，p38MAPK的蛋白表達，使炎症因子VEGF，hs，CRP等表達減少，並可降低LVM I，逆轉心肌肥厚，上述指標與SHR模型組比較有顯著性差異（P[1]。心肌肥厚與許多因素有關，近年來對高血壓引起左心室重構發生機製的研究已經涉及到炎症、細胞增殖和凋亡等複雜的細胞及分子機製。本課題組前期研究表明無患子皂苷可顯著降低腎性高血壓及自發性高血壓模型大鼠（spontaneously hypertensive rats， SHR）的血壓值，改善其左心室做功[2]，對腦缺血再灌注損傷模型大鼠炎症反應也有一定的抑製作用[3]，這提示著無患子皂苷對參與心血管疾病的炎症反應有一定的抑製作用，本文主要探討高血壓心肌肥厚與炎症有何關係，無患子皂苷是以何種機製調控炎症反應。
1 材料
1.1 藥物與試劑 無患子皂苷（sapindus saponin，Sap）為無患子科植物無患子樹的種子無患子假種皮中提取的有效部位，以常春藤皂苷元為對照品，經紫外分光光度法測定，總皂苷達95.6%，臨用時用蒸餾水配製為適當濃度備用。AngII酶聯免疫檢測試劑盒購於上海源葉生物科技有限公司（批號G80162）；hs，CRP酶聯免疫檢測試劑盒購於上海森雄科技實業有限公司（批號）；VEGF兔抗鼠多克隆抗體（批號 C0311）、即用型SP免疫組化染色試劑盒（批號KC）購於北京中杉金橋生物技術有限公司；ATIR兔抗鼠多克隆抗體購於北京博奧森生物技術有限公司（批號12560G）。
1.2 儀器 -80 ℃超低溫冰箱（美國Advantage）；Leica RM2135切片機（德國）；QP，B切片漂烘儀（科力飛儀器有限公司）；ZT，12P型生物組織自動脫水機（湖北孝感儀器有限公司）；BM，Ⅱ型病理組織包埋機（安徽電子科學研究所）；Olympus BX51型光學顯微鏡（日本Olympus公司）；GC，911 型γ，放射免疫計數器（中國科學技術大學科技實業總公司）；DY，1型水平電泳儀（上海醫用分析儀器廠）；ZF，1型紫外線透射反射分析儀（上海光明光學電子儀器廠）；RT，3100型全自動洗板機（深圳雷杜生命科學股份有限公司）；UV型紫外觀察燈（珠海黑馬醫學儀器有限公司）；GSM凝膠圖像分析管理係統（3.0）（美國SIM公司）。
1.3 動物 16周齡SHR 32隻，雌雄各半，體重200～250 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，實驗動物生產許可證號SCXK（京）2007，001；相同周齡健康Wistar，Kyoto strain（WKY）大鼠8隻，雌雄各半，體重200～250 g，由南京醫科大學動物中心提供，實驗動物生產許可證號SCXK（蘇）2008，0004。鼠料由安徽長臨河醫藥科技有限公司提供，合格證號 SCXK（皖） 2007，001。飼養於安徽醫科大學實驗動物中心，SPF級，實驗動物使用許可證號SYXK（皖）2011，007。
2 方法
2.1 動物分組及給藥 取SHR 32隻，雌雄各半（雌性未孕），適應實驗室7 d後，隨機均分為4組，每組8隻，即為SHR模型對照組、陽性對照組（卡托普利，27 mg·kg-1， 按照體表麵積折算，相當於臨床成人日用量的2倍）、無患子皂苷低、高劑量組（27，108 mg·kg-1， 根據前期預試驗得到無患子皂苷大致的最小有效量約為20 mg·kg-1，最大有效量約為486 mg· kg-1，故在此劑量範圍內設定低、高2個劑量）。另取8隻健康Wistar大鼠作為正常對照組。各藥物組大鼠分別按照上述劑量灌胃給藥，10 mL·kg-1，對照組和模型組大鼠灌胃等容量蒸餾水，給藥時間持續8周[4，5]。