2.4 半夏毒針晶刺激巨噬細胞對中性粒細胞趨化的影響 本實驗采用transwell小室模型，上室中加入RPMI1640混勻的中性粒細胞懸液100 μL，密度為1×106個/mL，下室中分別為：①含10%胎牛血清的RPMI1640+D，Hanks緩衝液；②含10%胎牛血清的RPMI1640+D，Hanks緩衝液配製的半夏毒針晶混懸液，使其終濃度為50 mg·L-1；③預培養的巨噬細胞+D，Hanks緩衝液；④預培養的巨噬細胞+D，Hanks緩衝液配製的半夏毒針晶混懸液，使其終濃度為50 mg·L-1。每組設置3個複孔。於37 ℃，5%CO2中培養1.5 h後，將小室取出，用棉簽將小室上表麵的殘留細胞刮去，並用快速瑞姬氏染色試劑盒對小室下表麵的細胞染色，於400倍鏡下觀察並對穿過微孔膜的中性粒細胞計數。
2.5 統計學方法 采用統計軟件 SPSS 16.0 進行數據處理，數據均以±s表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；多組間比較采用方差分析，進行方差齊性檢驗。
3 結果
3.1 量，毒關係考察 半夏毒針晶對巨噬細胞釋放TNF，α，IL，1β和IL，6作用影響的量。與空白組相比，刺激巨噬細胞3 h後，半夏毒針晶（10，20，50，100 mg·L-1）均可引起培養上清液中TNF，α，IL，1β和IL，6的含量顯著上升（P-1）刺激巨噬細胞1.5 h後，巨噬細胞培養上清液中TNF，α，IL，1β和IL，6的含量開始升高，與空白組相比呈極顯著性差異（P[10]，且其致炎作用與巨噬細胞釋放炎症因子相關。
3.3 半夏毒針晶對巨噬細胞表麵形態學的影響 半夏毒針晶（50 mg·L-1）刺激巨噬細胞1.5 h後，與正常形態相比，巨噬細胞形態變化顯著，毒針晶大部分被巨噬細胞所包裹吞噬，細胞膜完整但表麵皺褶明顯，偽足數量增多；刺激3 h後，巨噬細胞繼續吞噬毒針晶，細胞膜出現孔洞，細胞膜完整性下降。結果表明半夏毒針晶可以激活巨噬細胞的吞噬功能。
3.4 半夏毒針晶刺激巨噬細胞對中性粒細胞趨化的影響 半夏毒針晶（50 mg·L-1）刺激巨噬細胞1.5 h，transwell裝置內中性粒細胞的遷移數量增多，與D，Hanks+MΦ組相比呈極顯著性差異（P-1）均不能引起中性粒細胞顯著遷移。此結果進一步確證半夏毒針晶可引起顯著的致炎作用，同時表明巨噬細胞在半夏毒針晶的炎症反應中起到介導作用。
4 討論
急性炎症的主要病理學特征為血液動力學改變、血管通透性增高和白細胞滲出[11]。組織中廣泛分布的駐留巨噬細胞在急性炎症啟動和發展過程中具有關鍵作用：可以吞噬和降解細菌、異物；釋放促炎細胞因子如TNF，α，IL，1β和IL，6和中性粒細胞趨化因子，加劇炎症反應信號傳遞，吸引血管中大量中性粒細胞遷移到炎症部位，共同構成炎症反應的主要防禦環節。因此本文選擇小鼠腹腔巨噬細胞體外培養、巨噬細胞，中性粒細胞共培養2個模型，研究半夏毒針晶的刺激性毒性機製。實驗結果顯示，半夏毒針晶能夠引起巨噬細胞釋放大量促炎細胞因子TNF，α，IL，1β和IL，6，且具有劑量依賴性和時間依賴性；在掃描電鏡觀察下，半夏毒針晶被巨噬細胞包裹並吞噬，巨噬細胞形態變化顯著，細胞膜表麵皺褶明顯，偽足數量增多，細胞膜完整性下降，表明半夏毒針晶可以激活巨噬細胞的吞噬功能並具有顯著的致炎作用。半夏毒針晶刺激巨噬細胞後，能顯著誘導中性粒細胞遷移，且單純半夏毒針晶或巨噬細胞自身沒有這種作用，表明巨噬細胞在半夏毒針晶的炎症反應中起到關鍵的介導作用。故半夏毒針晶的刺激性毒性機製是毒針晶刺入組織，激活組織中的駐留巨噬細胞，引起吞噬、促炎細胞因子釋放、中性粒細胞大量遷移，最終導致強烈的急性炎症反應。
天南星科有毒中藥半夏、天南星、白附子、掌葉半夏均含有毒針晶，本課題組研究發現，以上4種中藥毒針晶中的凝集素類蛋白具有與毒針晶類似的致炎作用，可以引起家兔眼結膜水腫、小鼠腹腔炎症滲出液中PGE2含量增加、大鼠足蹠腫脹等[7，12]，而毒針晶和凝集素類蛋白的致炎機製以及兩者之間的相關性仍有待進一步研究。對天南星科有毒中藥的研究有助於深入了解其毒性機製，佐證了半夏生品可以通過薑製、礬製等臨床炮製方法達到減毒增效的目的，為有毒中藥炮製和臨床用藥提供理論依據，對改進中藥炮製方法具有參考價值。
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