實驗四十五:粗脂肪的定量測定(索氏抽提法)
【實驗目的】
(1)學習和掌握粗脂肪提取的原理和測定方法。
(2)熟悉和掌握重量分析法的基本操作要點。
【實驗原理】
脂肪不溶於水,易溶於乙醚、石油醚和氯仿等有機溶劑。根據這一特性,選用低沸點的乙醚(沸點35℃)或石油醚(沸點30~60℃)作溶劑,用索氏提取器可對樣品中的脂肪進行反複萃取,提取樣品中的脂肪後,蒸發去除溶劑,所得的物質即為脂肪或稱粗脂肪。由於有機溶劑從樣品中抽提出的不單純為脂肪,還含有其他脂溶性成分,因此本實驗測定的結果應為粗脂肪的含量。
索氏抽提器由浸提管、抽提瓶和冷凝管三部分連接而成。浸提管兩側有虹吸管及通氣管,裝有樣品的濾紙包放在浸提管內,溶劑加入抽提瓶中。當加熱時,溶劑蒸氣經通氣管至冷凝管,冷凝後的溶劑滴入浸提管對樣品進行浸提。當浸提管中溶劑高度超過虹吸管高度時,浸提管內溶有脂肪的溶劑即從虹吸管流入抽提瓶。如此經過多次反複抽提,樣品中脂肪逐漸全部濃集在抽提瓶中。抽提完畢,利用樣品濾紙包脫脂前後減少的重量來計算樣品的脂肪含量。
【試劑與器材】
1.試劑
無水乙醚。
2.器材
索氏提取器、恒溫水浴鍋、烘箱、幹燥器、脫脂濾紙、脫脂棉、脫脂線等。
3.材料
穀物油料種子或其它樣品。
【實驗操作】
1.操作前準備
將索氏提取器各部分充分洗滌並用蒸餾水清洗後烘幹。脂肪燒瓶在105℃的烘箱內幹燥至恒重。(前後兩次稱量差不超過2mg)。
2.樣品預處理
稱取2~4g已粉碎、過40目篩的樣品原料,用濾紙包好(不可紮得太緊,以樣品不散漏為宜),在烘箱100~105℃條件下烘幹至恒重,準確稱重。
3.樣品提取和測定
將烘幹稱重的濾紙包放入幹燥的浸提管內,濾紙的高度不能超過虹吸管頂部。浸提管上部連接冷凝管,並用一小團脫脂棉輕輕塞入冷凝管上口;浸提管下部連接抽提瓶,抽提瓶中加入約瓶體1/2的無水乙醚,並置於恒溫水浴鍋中。打開冷卻水,開始加熱抽提。加熱的水浴鍋溫度控製使提取液在每6~8min回流一次為宜。抽提時間為6~10h,以浸提管內乙醚滴在濾紙上不顯油跡為止。
抽提完畢,移去上部冷凝管,取出濾紙包。再重新連接好冷凝器,在水浴鍋上蒸餾回收乙醚。
4.稱量
濾紙包置於烘箱100~105℃烘幹溶劑至恒重,準確稱重。濾紙包脫脂前後的質量差即為樣品中粗脂肪的質量。
【結果處理】
粗脂肪(%)=m1-m2m×100
式中m1——抽濾前濾紙包的質量;
m2——抽濾後濾紙包的質量;
m——樣品質量。
【注意事項】
濾紙包置於烘箱烘幹溶劑時,為防止醚氣燃燒著火,烘箱應先半開門。
實驗四十六:卵磷脂的提取及鑒定
【實驗目的】
(1)學習和掌握卵磷脂的提取和鑒定方法。
(2)了解卵磷脂的生物學功能、化學性質。
【實驗原理】
卵磷脂是甘油磷脂的一種,是細胞膜磷脂雙分子層的重要成分。卵磷脂又稱磷脂酰膽堿,在動植物體內均有分布,在動物的腦、精液、肝、腎上腺和紅細胞中含量較多,蛋黃中含量可達8%~10%。
1.卵磷脂生物學功能
(1)卵磷脂是生物膜的骨架。
(2)卵磷脂是肌體代謝所需能量的來源。
(3)卵磷脂控製肌體脂肪代謝,防止形成脂肪肝(“脂肪肝”是當肝髒脂蛋白不能及時將肝細胞脂肪運出,造成脂肪在肝細胞中的堆積,占據肝細胞的很大空間,影響了肝細胞的機能,甚至使許多肝細胞破壞,結締組織增生,造成“肝硬變”)。