高效液相色譜法測定不同產地葛根中葛根素、大豆苷及大豆苷元的含量
金文姍談鈺元陳有根王妍。（北京裕科植物中間體開發有限公司，北京，100007）
摘要：
目的：建立同時測定葛根中葛根素、大豆苷及大豆苷元的含量測定方法。方法：選用SYSMMETRY-C18色譜柱（3.9mm×150mm，5μm），甲醇-1%醋酸水溶液為流動相梯度洗脫，紫外檢測波長為250nm，HPLC法。結果：平均回收率分別為101.7、100.7和101.7%（n=3），RSD分別為0.43、0.82和1.50%（n=3）。結論：本法簡便，準確，快速；適用於含葛根素、大豆苷及大豆苷元的葛根藥材及製劑的質量控製。
關鍵詞：
二極管陣列高效液相色譜法；梯度洗脫；葛根素；大豆苷；大豆苷元；野葛葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi或甘葛藤P.thomsonii Benth.的幹燥根。用於外感發熱頭痛、頸強等。現代研究證實，葛根中的主要有效成分為葛根素、大豆苷、大豆苷元等，它們均屬於異黃酮類化合物，具有抗炎解熱、擴張冠狀動脈血管、增加冠狀動脈血流量的作用，同時也有降低血壓的作用。有關葛根素等異黃酮的含量測定研究已有不少報道，2000年版《中國藥典》以其中的葛根素為含量測定的指標，但采用高效液相色譜梯度洗脫法同時測定葛根中葛根素、大豆苷及大豆苷元的含量測定方法未見文獻報道。本文建立了同時測定葛根中葛根素、大豆苷及大豆苷元的高效液相含量測定方法，測定和比較了6個不同產地的野葛根藥材中的含量，為更好地控製葛根藥材及其製劑的內在質量提供了依據。
1.儀器與試藥
WATERS公司高效液相色譜係統，400型控製器，996型二極管陣列檢測器，717型自動進樣器，MILLENNIUM32色譜工作站，濾膜（美國 Millipor Corporation，孔徑0.45μm）。葛根素對照品購自中國藥品生物製品檢定所，批號753-200007；大豆苷及大豆苷元對照品購自美國CHROMADEX公司，批號分別為01-04005-410、01-04006-416。6個不同產地的野葛根藥材樣品（詳見樣品測定結果表）由各產地藥材公司郵購得到，采收時間均為2000年10月，經本公司陳有根博士鑒定，均符合2000年版《中國藥典》的規定。甲醇（南開大學精細化學實驗廠）為色譜純，水為重蒸水，冰醋酸為分析純。
2.實驗條件
2.1色譜條件
色譜柱為WATERS公司SYSMMETRY C18（3.9mm×150mm，5μm）柱，流動相 甲醇-1%醋酸水溶液梯度洗脫，梯度洗脫條件；檢測波長 250nm；流速1.0mL/min-1；柱溫 室溫。按葛根素峰計算，柱理論塔板數大於1000。
2.2標準曲線的繪製
精密稱取葛根素10.21mg、大豆苷2.18mg及大豆苷元2.02mg，置於50ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容。分別吸取上述對照品溶液1，3，6，9，12，15μL，進樣，按上述色譜條件測定峰麵積積分值，以峰麵積積分值為縱坐標，對照品進樣量為橫坐標繪製曲線，計算回歸方程。葛根素：Y1.=6011.5+2137300X1，r=0.9999，線性範圍（μg）0.20～3.06。大豆苷：Y2.=9452.6+ 158698X2，r=0.9996，線性範圍（μg）0.04～0.65。大豆苷元：Y3.=125541.2+66890.8X3，r=0.9995，線性範圍（μg）0.04～0.61。
2.3精密度試驗
精密吸取對照品溶液10μl，重複進樣5次，測得峰麵積積分值，分別算出葛根素、大豆苷及大豆苷元的峰麵積積分值之平均值為19335676，3434360及26081086，其RSD分別為1.1%，2.0%，1.2%。
2.4穩定性試驗
精密吸取葛根素、大豆苷及大豆苷元對照品混合液10μl，分別在0，1，4，6，10h測定，其峰麵積積分值的平均值為19475695，3494530及24329572，RSD分別為1.3%，1.8%，1.6%，表明10h內葛根素、大豆苷及大豆苷元穩定性良好。