正文 第二章 小鼠骨髓細胞染色體標本製備與觀察(1 / 1)

實驗目的

1.初步掌握小鼠骨髓細胞染色體標本的製備方法。

2.觀察幾種實驗動物的染色體核型。

實驗原理

在有絲分裂指數相當高的骨髓細胞中,可以直接得到中期細胞而不必像血淋巴細胞或其它組織那樣要經過體外培養。

用適量的秋水仙素溶液注人動物體內,可抑製分裂細胞紡綞絲的形成,從而積累大量的分裂中期骨髓細胞。通過常規製片方法,直接製備染色體標本。

實驗內容

(一)小鼠骨髓細胞染色體製備及觀察

1.染色體標本的製備:選擇體重在IB~20B的健康小鼠,在實驗前2~3小時於腹腔注射秋水仙素。

取材:用斷髓法處死小鼠,從髖關節處斷其後肢,剝去皮肉,用70%酒精浸濕的紗布擦去骨上殘肉,再用幹紗布擦幹,從膝關節處斷下完整股骨。

收集細胞:剪去股骨兩頭,用裝有6號針頭的注射器裝入3ml生理鹽水,插入骨髄腔中,反複衝洗骨髓細胞於刻度離心管中,直至股骨變白。棄掉股骨,換上41號針頭用注射器反複吹打骨髓細胞使其分散。將細胞液以速度離心6分鍾。

固定:棄上清液,加100ml新固定液,用吸管輕輕吹打細胞團,製成骨髓細胞懸液,室溫下固定30分鍾。在時間允許時可重複固定一次。

製備細胞懸液:棄上清液,加入5ml(視細胞多少而定)新固定液,混勻後製成細胞懸液。

滴片:用吸管取細胞懸液少許,滴2滴在冰水浸過的載玻片上,然後順載玻片斜麵用口對準液滴用力吹一口氣,使細胞散開,晾幹或用酒精燈火焰幹燥。

2.觀察:在低倍鏡下觀察,尋找染色體分散的中期分裂相,移至視野中央,轉換油鏡觀察。

細胞中染色體計數:為了避免計數時重複和遺漏,在計數前應先按該細胞的染色體自然分布狀態,劃分幾個區域。然後按順序數出各區染色體的實際數目,最後加在一起,即為該細胞染色體的總數。

(二)幾種實驗動物的染色體核觀察:

家兔和大蟾蜍等動物常作為生物學和醫學的實驗動物,因此醫學生了解這些實驗動物的核型非常必要。

家兔染色體核型:家兔三倍體細胞染色體數目,其雄性染色體為XY型,雌性為XX型。油鏡下可見到細胞中有三種類型的染色體:中著絲粒染色體、亞中著絲粒染色體和近端點著絲粒染色體。按照染色體大小和著絲粒的位置可將染色體分為五組。

中華大蟾蜍染色體核型:大蟾蜍二倍體細胞染色體。細胞中有兩種類型染色體:中著絲粒染色體和亞中著絲粒染色體。

按照染色體大小和著絲粒位置不同,可將染色體分為四組。