實驗目的
通過對小鼠睾丸減數分裂染色體標本的製備與觀察,掌握減數分裂過程中,染色體由雙倍到單倍的幾個主要時期的變化特點;學習減數分裂標本簡便、快速的製作方法;了解有性生殖過程中,減數分裂的意義。
實驗原理
減數分裂發生在生物性細胞形成過程中,是保證物種染色體數目穩定和使物種適應環境變化而不斷進化的重要生物學機製。哺乳動物在性成熟後,睾丸內的性細胞總是在分批分期相繼不斷地成熟。因此,對其睾丸進行一定的技術處理,隨時可獲得減數分裂過程中各期染色體標本。
實驗材料
(―)器材:
1.光學顯微鏡;離心機;
2.解剖器材:注射器、解剖鑷、解剖剪、培養皿,10磯1刻度離心管、解剖板、試管架、吸管。
3.冰凍載玻片,擦鏡紙、濾紙片。
(二)試劑:
80%生理鹽水;20%檸檬酸鈉液;3:1甲醇冰醋酸固定液;染液;秋水仙素。
(三)實驗動物
性成熟的雄性小白鼠。
實驗步驟
(一)秋水仙素處理
取睾丸前3~4小時小鼠經腹腔注入秋水仙素0.2~0.4ml。
(二)取曲細精管
用頸椎脫臼法處死小鼠,將小鼠放在解剖板上,固定四肢,迅速剖開腹部,取出睾丸放在盛有2%檸檬酸鈉溶液的培養皿中,用剪刀剔除被膜,分離曲細精管,移入10ml刻度離心管,加2%檸檬酸鈉5~6ml將曲細精管衝洗一次,再加5~6ml檸檬酸鈉溶液。
(三)製細胞懸液
待曲細精管沉於離心管後,用吸管吹打並研磨,使減數分裂中各期細胞脫落,然後用吸管緩緩吸去肉眼所見的膜狀物,製成細胞懸液(同時有部分精子存在)
(四)觀察鏡檢:
先以低倍鏡找到要觀察的細胞,再換高倍鏡觀察,尋找並觀察處於第一次減數分裂時期的分裂相,表現出20對同源染色體相互配對的現象。20對同源染色體中有19對染色體呈環狀連接,隻有XY染色體表現出特殊的一個末端和二個末端相接。而且Y染色體又表現一定程度的深染現象。尋找和觀察第二次減數分裂過程中的中期細胞的染色體,觀察處在染色單體尚未分離前的20個姐妹染色體形態。
實驗材料
試劑:0.25%~0.5%秋水仙素。器材:動物飼養缸。其它同上。
實驗內容
1.將動物室供給的雄性黑斑蛙於室溫中用動物飼養缸培養24小時。
2.按體重腹腔注射秋水仙素。100g體重注入1.5ml,在室溫中培養24小時後取出精巢,置於加有低滲液3~5ml的小培養皿中(低滲液為0.075%)用解剖針撕碎,使細胞充分溢出,用吸管將含有溢出細胞的低滲液移到離心管中。