1934年1月，中華蘇維埃第二次代表大會在瑞金召開。楊靖宇雖未參加這次大會，但仍當選為中華蘇維埃共和國中央執行委員會委員。
1934年2月21日，在臨江縣三岔子城牆砬子街，楊靖宇主持召開了南滿17支抗日義勇軍聯合會議。會議正式決定成立抗日聯軍總指揮部，楊靖宇任總指揮。
1934年11月7日，在臨江縣八道江板石嶺，東北人民革命軍第一軍成立，楊靖宇任軍長兼政委。
1935年10月上旬，以東北人民革命軍第一軍為主體，聯合其他武裝，整編為東北抗日聯軍第一軍。10月中旬，楊靖宇任軍長兼政委。
1936年7月，抗聯第一軍與活動在東滿的抗聯第二軍又合編為東北抗聯第一路軍。楊靖宇任第一路軍總司令兼政委，王德泰任副總司令。南滿、東滿黨組織合並組成中共南滿省委，魏拯民任省委書記。
1937年7月7日，盧溝橋事變爆發，中國進入全麵抗戰時期。
1938年9月29日11月6日，中共中央在延安召開了擴大的六屆六中全會。毛澤東高度評價了楊靖宇和他所領導的抗聯對全國抗日所作出的巨大貢獻。
1939年11月，楊靖宇率領司令部直屬部隊400多人從樺甸進入蒙江。
1940年1月9日到1月30日，21天的時間內，楊靖宇率部隊與敵人作戰14次。1940年1月21日，軍部警衛旅一團參謀丁守龍被捕叛變；2月1日，司令部特衛排長張秀峰攜武器、密件、現金投敵叛變，進一步暴露了楊靖宇的行蹤。日軍急忙調動大隊人馬圍攻楊靖宇。2月12日，楊靖宇身邊僅剩下六名戰士。2月15日，在敵偵察機引導下，地麵敵人開始對楊靖宇進行搜索。2月18日，警衛員朱文範、聶東華在購買食物時與追捕的敵人交火後犧牲。2月22日晚，農曆正月十五，楊靖宇在距蒙江縣城西南六公裏的保安村三道崴子度過了他人生的最後一個夜晚。
1940年2月23日下午3時50分，敵人在三道崴子包圍了楊靖宇。下午4時30分，楊靖宇身中數彈，倒了下去。將軍年僅35歲。
1945年4月23日，中共七大在延安勝利召開。為召開七大，中共中央作了充分的準備，早在1937年12月，便成立了準備委員會，楊靖宇是25名準備委員會委員之一。可當中共七大召開時，楊靖宇已經為中華民族的解放事業獻出了寶貴的生命。