鞘氨醇磷酸酯（SIP）是一種存在於細胞中的具有生物活性的脂質信使。SIP能活化多種信號傳導途徑，動員內源性鈣離子釋放，介導細胞增殖或抑製凋亡。哺乳動物血中納摩爾級的SIP濃度主要與高密度脂蛋白、白蛋白有關。細胞外的SIP主要有兩個途徑產生：一是細胞外鞘氨醇的磷酸化，二是細胞內SIP的釋放。目前針對生物樣品中鞘氨醇磷酸酯相關化合物的研究很多。
（一）原理
分離血漿中目標成分由甲醇、氯仿依次提取，合並有機相經濃縮定容，經超高效液相色譜串聯質譜測定。內標法定量，方法的檢出限小於5×10-12g。
（二）儀器與試劑
1.儀器
(1)超高效液相色譜（配有串聯四級杆質譜檢測器）；
(2)液體混勻器；
(3)離心機；
(4)氮吹儀。
2.試劑
所用水均為去離子水或同等蒸餾水；所用試劑如不加說明均為分析純試劑。
(1)甲醇（色譜純）；
(2)乙腈（色譜純）；
(3)氯仿；
(4)配製鞘氨醇磷酸酯、DH-鞘氨醇磷酸酯標準溶液：稱取適量標準品用氯仿∶甲醇∶水（1.5∶1.4∶0.2，體積比）配製成400μg/mL的標準溶液；
(5)配製C17-鞘氨醇磷酸酯標準品（內標）：稱取適量標準品用氯仿∶甲醇∶水（1.5∶1.4∶0.2，體積比）配製成400μg/mL的標準溶液。
(6)EDTA抗凝血；
(7)哺乳動物全血。
（三）測定方法
1.樣品的製備
血樣18℃下1000×g離心25min，分離出，上層和中間層樣品充分混合於3500×g 18℃下再次離心12min。再取出上層液加入內標物質C17-鞘氨醇磷酸酯21.3×10-12g後，用水稀釋定容到1mL製成血漿樣品。保存於-80℃用於脂肪萃取。
取上述血漿樣品加入2mL甲醇飽和的偏磷酸鈉溶液，3600r/min 4℃離心20min ，收集下層溶液於玻璃管中。剩餘液用1.5mL氯仿提取，重複提取一次後合並有機相並置於氮氣環境下濃縮至幹，呈油脂狀。油脂殘留物經液氮凝結，再經過低溫凍幹處理後用200μL甲醇溶解，用乙腈-水溶液（8∶2，體積比）定容至1mL。濾膜過濾後，用超高效液相色譜串聯質譜分析。
2.色譜條件
(1)色譜柱：ACQUITY UPLCTM BEH C18柱（1.7μm，150mm×2.1mm）或相當者；
(2)流動相：A相為30mmol/L乙酸銨溶液 (pH 4)；B相為乙腈-甲醇-30mmol/L乙酸銨緩衝液 (pH4)(85∶10∶15，體積比)；
(3)流速：0.55mL/min；
(4)梯度洗脫；
(5)進樣量：5μL。
3.質譜條件
（1）多反應監測：鞘氨醇磷酸酯378.2→79.2，DH-鞘氨醇磷酸酯378.2→79.0，內標物364.1→79.0；
（2）簾氣 (CUR)（氮氣）：275.8kPa；
（3）霧化氣(GS1)：379.23kPa；
（4）輔助氣(GS2)：137.9kPa；
（5）去溶劑溫度(TEM)：550℃；
（6）碰撞活化解離(CAD)：68.95kPa；
（7）離子源噴射電壓(IS)：-4500V。
4.測定
準確吸取標準物溶液和樣品提取液各5μL分別注入色譜係統，以標準物的保留時間與多反應監測離子對定性，通過內標方法計算S1P和DH-S1P的含量。
（四）結果計算
參考文獻
Adele Cutignano，Ugo Chiuminatto，Filomena Petruzziello，Filomena Monica Vella，Angelo Fontana.UPLC-MS/MS method for analysis of sphingosine 1-phosphate in biological samples.Prostaglandins & other Lipid Mediators，2010，93(1～2):25～29.