正文 二十七、超高效液相色譜串聯質譜測定大鼠血漿中的青蒿素(1 / 1)

青蒿素是從中藥青蒿中提取的有過氧基團的倍半萜內酯藥物,毒性低,使用安全,是一種有效的抗瘧疾物質。主要用於間日瘧、惡性瘧的症狀控製,以及耐氯喹蟲株的治療,也可用於治療凶險型惡性瘧,如腦型、黃疸型等。

(一)原理

血清樣品經乙腈沉澱蛋白,離心後,將有機相過濾,經超高效液相色譜串聯質譜測定。內標法定量,方法的定量檢出限(LLOQ)為4ng/mL。

(二)儀器與試劑

1.儀器

(1)超高效液相色譜(配有串聯四級杆質譜檢測器);

(2)液體混勻器;

(3)離心機。

2.試劑

本實驗用水均為去離子水或同等蒸餾水;所用試劑如不加說明均為分析純試劑。

(1)甲醇(色譜純);

(2)乙腈(色譜純);

(3)甲酸;

(4)配製青蒿素血清標準溶液:稱取適量青蒿素標準品用甲醇配製成1mg/mL的標準儲備液,使用前取50μL標準儲備液加入5mL空白大鼠血清中,製得濃度10000ng/mL青蒿素血清標準溶液,使用前用空白血清稀釋至合適濃度;

(5)配製β-青蒿乙醚標準溶液(內標):稱取適量標準品用甲醇配製成20μg/mL的標準儲備液。

(三)測定方法

1.樣品的製備

取100μL含有青蒿素的血清樣品到Eppendorf微管中,加入50μL內標溶液(20ng/mL),然後加入300μL乙腈沉澱蛋白質。微管在液體混勻器上旋渦5min,10000r/min離心20min,取上層有機相,經濾膜過濾後,用超高效液相色譜串聯質譜分析。

2.色譜條件

(1)色譜柱:ACQUITY UPLCTM BEH C18柱(1.7μm,50mm×2.1mm)或相當者;

(2)流動相:甲醇-0.3%甲酸水溶液=80∶20 (體積比);

(3)流速:0.3mL/min;

(4)柱溫:45℃;

(5)進樣量:15μL。

3.質譜條件

(1)選擇反應監測(SRM):青蒿素305.4→151.10,內標物青蒿乙醚335.2→163.10;

(2)正離子模式;

(3)去溶劑溫度:350℃;

(4)毛細管電壓:3.5kV

(5)提取電壓:2V;

(6)射頻鏡頭電壓:0.2V;

(7)錐電壓:40V;

(8)源溫度 100℃;

(9)去溶劑化氣體(氮氣):550L/h;

(10)錐氣體(氮氣):25L/h;

(11)碰撞能量:青蒿素22eV,青蒿乙醚21eV。

4.測定

準確吸取標準物溶液和樣品提取液各15μL分別注入色譜係統,以標準物的保留時間與選擇反應監測離子定性,通過內標方法計算青蒿素的含量。

(四)結果計算

參考文獻

Lie Li,Deepthi Pabbisetty,Paulo Carvalho,et al.. Ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric method for the determination of Artemisinin in rat serum and its application in pharmacokinetics.Journal of Chromatography B,2008,867 (1):131~137.

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