1.實驗目的
酶聯免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，簡稱ELISA）是在免疫酶技術（immunoenzymatic techniques）的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術，ELISA過程包括抗原（抗體）吸附在固相載體上稱為包被，加待測抗體（抗原），再加相應酶標記抗體（抗原），生成抗原（抗體）-待測抗體（抗原）-酶標記抗體的複合物，再與該酶的底物反應生成有色產物。借助分光光度計的光吸收計算抗體（抗原）的量。待測抗體（抗原）的定量與有色產生成正比。
用ELISA法來篩選沙門菌，采用的抗體既可以是單克隆抗體（McAb），也可以是多克隆抗體。其基本步驟是首先包被抗沙門菌的單克隆抗體（多克隆抗體），然後再微孔板內加入經過前增菌和選擇性增菌的待檢樣品，樣品中如有沙門菌存在，則與微孔板內的特異性抗體結合形成複合物。洗滌掉多餘的反應物，加入酶標二抗，則形成抗原抗體酶標二抗複合物。加入底物，測定光密度，當光密度值大於或等於臨界值時，即可推斷為陽性。
2.儀器和材料
（1）聚苯乙烯微量細胞培養板（平板，40，96孔）。
（2）酶聯免疫檢測儀。
（3）辣根過氧化物酶羊抗兔IgG，工作稀釋度1：1000。
（4）包被液0.05mol/L pH9.6碳酸緩衝液，4℃，保存，Na2CO3 0.15g，NaHCO3 0.293g，蒸餾水稀釋至100mL。
（5）稀釋液0.01mol/L pH7.4，PBS-Tween-20，4℃，保存。氯化鈉8g，KH2PO4 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，Tween-20，0.5mL，蒸餾水加至1 000mL。
（6）洗滌液同稀釋液。
（7）封閉液0.5%雞卵清蛋白，pH7.4 PBS。
（8）鄰苯二胺溶液（底物）：臨用前配製0.1mol/L檸檬酸（2.1g/100mL），6.1mL，0.2mol/L Na2HPO4·12H2O（7.163g/100mL）6.4mL，蒸餾水12.5mL，鄰苯二胺10mg，溶解後，臨用前加40μL 30% H2O2。
（9）終止液2mol/L H2SO4。
（10）腸炎沙門菌標準菌株或其他沙門菌菌株。
3.操作步驟
（1）包被抗體用包被液將抗沙門菌的單克隆抗體（多克隆抗體）作適當稀釋，一般為1～10μg/孔，每孔加200μL，37℃溫育1h後，4℃冰箱放置16～18h。
（2）洗滌倒盡板孔中液體，加滿洗滌液，靜放3min，反複3次，最後將反應板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡。
（3）加封閉液200μL，37℃放置1h。
（4）洗滌同（2）。
（5）加被待檢樣品用稀釋液將待檢樣品做幾種稀釋，每孔200μL。同時做稀釋液對照。37℃放置2h。
（6）洗滌同（2）。
（7）加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG，每孔200μL，放置37℃ 1h。
（8）洗滌同（2）。
（9）加底物鄰苯二胺溶液加200mL，室溫暗處10～15min。
（10）加終止液每孔50μL。
（11）觀察結果用酶聯免疫檢測儀記錄490nm讀數。［（待測樣本OD值-陰性對照OD值）/陰性對照OD值］＞1為陽性，目測無色或明顯淡於陰性對照為陰性。