三、根據物質的吸附性差別進行分離
【考點】矽膠、大孔樹脂和聚酰胺色譜法及其應用
1.矽膠、氧化鋁色譜法
（1）對極性物質具有較強親和能力。故極性強的溶質優先被吸附。化合物的極性由分子中所含官能團決定。官能團的極性強弱順序為：
－COOH＞－OH＞－NH2、－NHR′＞－CHO＞－CO－＞－COO－
（2）溶劑極性越弱，則吸附劑對溶質的吸附能力越強。溶劑極性增強，則吸附劑對溶質的吸附能力減弱。
（3）溶質即使被矽膠、氧化鋁吸附，但加入極性較強的溶劑時，又可被後者置換洗脫出來。
（4）為避免發生化學吸附，酸性物質宜用矽膠，堿性物質則宜用氧化鋁進行分離。
注意與活性炭色譜法區分。活性炭色譜法：活性炭屬非極性吸附劑，吸附規律與矽膠、氧化鋁相反。
2.大孔樹脂色譜法
（1）吸附原理：大孔樹脂是吸附性和分子篩性原理相結合的分離材料。吸附性是由於範德華引力或產生氫鍵的結果，分子篩性是由於其本身多孔性結構所決定的。
（2）影響吸附的因素：大孔吸附樹脂本身的性質、溶劑的性質和化合物的性質是影響吸附的3個重要因素。
①一般非極性化合物在水中易被非極性樹脂吸附，極性樹脂則易在水中吸附極性物質。
②物質在溶劑中的溶解度大，樹脂對此物質的吸附力就小，反之就大。
③能與大孔樹脂形成氫鍵的化合物易被吸附。
（3）洗脫液的選擇：洗脫液可使用甲醇、乙醇、丙酮、不同濃度的酸或堿等。一般用水洗脫糖等極性物質，甲醇、乙醇洗脫皂苷等成分，堿溶液洗脫酸性成分，酸溶液洗脫堿性成分，丙酮洗脫中性親脂性成分。
3.聚酰胺色譜法屬於氫鍵吸附，適用於分離酚類、醌類和黃酮類化合物。也可用於植物粗提物的脫鞣質。
（1）吸附原理：酰胺羰基與酚類、黃酮類化合物的酚羥基，或酰胺鍵上的遊離氨基與醌類、脂肪羧酸上的羰基形成氫鍵締合而產生吸附。
（2）吸附規律：吸附強弱取決於各種化合物與聚酰胺形成氫鍵締合的能力。
①形成氫鍵的基團數目越多，吸附力越強。
②形成氫鍵的基團易形成分子內氫鍵者吸附力減弱。
③分子中芳香化程度高，吸附性強。
一般情況下，各種溶劑在聚酰胺柱上的洗脫能力由弱至強的順序為：水→甲醇→丙酮→氫氧化鈉水溶液→甲酰胺→二甲基甲酰胺→尿素水溶液。
四、其他分離方法
【考點】凝膠過濾法、膜分離法、離子交換色譜和分餾法在中藥化學成分分離中的應用
1.凝膠過濾法又稱分子篩色譜、凝膠滲透色譜、排阻色譜，是根據物質分子大小差別進行分離的一種方法。
（1）常用葡聚糖凝膠（Sephadex G）以及羥丙基葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20）。
（2）Sephadex G隻適於在水中應用。Sephadex LH-20既可在水中應用，又可在由極性與非極性溶劑組成的混合溶劑中應用，適用於不同類型有機物的分離。
2.膜分離法膜分離法主要包括滲透、反滲透、超濾、電滲析、透析和液膜技術等。根據物質分子大小差別進行分離。
透析法多用於水溶性的大分子和小分子物質的分離，如蛋白質、酶、多糖分離過程中的脫鹽。按照孔徑大小，可將透析膜分為微濾膜、超濾膜、反滲透膜和納米膜。