於三明培養基。馬鈴薯200克，葡萄糖20克，磷酸二氫鉀0.7克，硫酸鎂0.6克，蛋白腖3克，酵母膏(或酵母片)2克，瓊脂20克，水1000毫升。
2.母種培養基的製作
(1)濾液製作將馬鈴薯洗淨，削去皮與芽眼，稱取200克，切成薄片。取1000毫升水放入鍋中煮馬鈴薯，煮沸後保持20~25分鍾，然後用4~8層紗布過濾，取濾液加水至1000毫升。
(2)培養基製作濾液繼續用文火加熱，並準確稱取其餘各種藥品，加入馬鈴薯汁中攪勻。先用冷水浸泡瓊脂條5~10分鍾，然後撈出撕碎，放入鍋中，攪動至完全溶解。
(3)分裝試管將製好的培養基趁熱分裝試管。常用的試管規格為18毫米伊180毫米或20毫米伊200毫米，每批所用的試管要大小一致，並且裝量要相同，為試管長度的1/5~1/4。分裝時，注意不能使培養基沾在試管口，防止棉塞汙染。分裝好的試管在培養基凝固前必須立放。
(4)棉塞製作取一塊完整的不脫脂棉花，大小厚薄根據試管口的大小而定。用疊放式將棉花做成棉球，最好外包一層紗布，塞入試管口。鬆緊要適度，以用手提起棉塞而試管不脫落為度。要求棉塞塞入試管的長度約為總長的2/3。
3.母種培養基的滅菌將塞好棉塞的試管7~10個紮成一捆，用一層防潮紙或牛皮紙包在外麵，用線捆緊。在高壓鍋內加水至規定水位(約3000毫升)，再放入消毒桶，固定好鍋蓋，防止漏氣。然後將滅菌鍋放在煤氣爐或電爐上，關上排氣閥加熱。當壓力表指針到0.5千克/平方厘米時，打開放氣閥，排出鍋內冷氣，待壓力降至“0冶時，再關上排氣閥。再如此重複一次，會使滅菌效果更好。當鍋內壓力達到1千克/平方厘米時，調節火源，使壓力維持在1千克/平方厘米。
30~40分鍾後，關閉火源，等壓力自然降至“0冶時，打開排氣閥，排出鍋內的水蒸氣，利用餘熱烘烤紙和棉塞半小時後取出。
試管從高壓鍋內取出後，在幹淨的房間內擺成斜麵，斜麵長度約為試管長度的1/2，不得超過3/5。試管成捆斜放比較好，斜麵表麵的冷凝水會較少。如果室溫太低，斜麵表麵就較易出現冷凝水，對接種和菌種生長不利。這時可在斜麵上蓋幾層幹淨紗布保溫，使其慢慢凝固，冷凝水就會大量減少。母種培養基做好後，如果一時用不完，可放入冰箱保鮮層保存20天左右。
(二)原種、栽培種培養基的配製
1.常用原種、栽培種培養基的配方
(1)棉籽殼培養基
配方一：棉籽殼88%，麩皮或米糠10%，石膏1%，過磷酸鈣1%，另加石灰0.5%。適用於培養平菇原種。
配方二：棉籽殼93%，麩皮或米糠5%，石膏1%，過磷酸鈣1%，另加石灰0.5%。適用於培養平菇栽培種。
配方三：棉籽殼62%，木屑(闊葉樹種)20%，麩皮或米糠15%，白糖1%，石膏1%，過磷酸鈣1%。適用於培養金針菇、香菇、靈芝、猴頭菇、杏鮑菇、木耳等木生菇耳類。
(2)麥粒菌種培養基適用於培養蘑菇、姬鬆茸、草菇等菇類。
配方一：小麥粒1000克，石膏粉20克，用1%石灰水浸泡。
配方二：小麥粒1000克，石膏粉12克，碳酸鈣3克。
(3)木屑麩皮培養基適用於培養香菇、木耳等木生菇耳類。
配方：木屑(闊葉樹種)47%，棉籽殼35%，麩皮(或米糠)15%，糖1%，石膏1%，過磷酸鈣1%。
(4)玉米芯培養基適用於猴頭菇、木耳、平菇、香菇、金針菇等。
配方：碎玉米芯80%，麩皮或米糠18%，石膏粉1%，過磷酸鈣1%，料水比1：1.2~1：1.5。把新鮮的玉米芯粉碎成玉米粒大小，按比例準確稱量其他原料，拌勻並加水調好，燜2~3小時，即可裝瓶。
(5)種木培養基適用於香菇、木耳、銀耳等段木接種。
配方：種木1000個，木屑100克，米糠50克，水150~200毫升。
(6)糞草培養基適用於培養蘑菇、草菇等草生菇類原種、栽培種。
配方：糞草90千克，麩皮或米糠8千克，白糖1千克，碳酸鈣1千克。
(7)草粉培養基適用於草菇。
配方：麥草粉或稻草粉97%，蔗糖1%，石膏粉1%，過磷酸鈣1%。
2.原種、栽培種培養基的製作
(1)棉籽殼、木屑菌種製作先將棉籽殼或木屑，麩皮或米糠，石膏幹時拌和均勻，然後倒入水調拌，充分攪拌，使其充分吸水，幹濕均勻。混合培養料含水量為55%~65%，抓一把培養料，用手握緊，以手指間有水滲出但不滴落為宜。
培養基配製好後，立即裝瓶或裝袋滅菌，不能過夜，尤其是在高溫季節。
①瓶裝菌種。原種容器一般采用透明的專用菌種瓶，容量為750毫升。裝料時，邊裝邊振動，以使料上下鬆緊均勻一致。裝至瓶肩後，壓平料麵。培養基中間用錐形木棒紮一洞，離瓶底2厘米，便於菌絲體蔓延。將瓶口沾留的棉籽殼擦淨，塞上棉塞，然後用防水紙或牛皮紙包紮好，即可滅菌。
②袋裝菌種。一般采用高壓聚丙烯袋和低壓高密度聚乙烯袋，其規格以長27厘米、寬12厘米、厚0.05厘米為宜。製作平菇栽培種，選用長33厘米、寬17厘米、厚0.05厘米規格的塑料袋。選取的袋子最好是折角袋，如果是平底袋，就要先將袋的兩個底角塞入，使袋底成方形，再裝料。裝料時，邊裝邊上下振動料袋，以使料緊實。裝至袋子的2/3後，將料麵壓平。然後擦淨袋外的棉籽殼，用手握住袋口，套入塑料頸圈，將塑料袋口向下翻出3厘米左右，用1層中間打孔的塑料膜和防水紙或牛皮紙封紮，在外麵套一層保護袋，即可進行滅菌。
袋裝菌種在製作過程中一定要輕拿輕放，以防戳破袋麵。平菇、靈芝、猴頭菇等一些菌絲生長勢強、生長速度較快的菇類菌種適合製作袋裝菌種。而像香菇、金針菇等一些菇類就不適合製作袋裝菌種，因為菌絲生長速度會很慢，尤其是在高溫季節。
(2)麥粒菌種製作選用新小麥製種，菌絲吃料慢，長勢弱，所以最好選用陳小麥，以儲存一年的為宜。選擇顆粒飽滿且無黴變的小麥粒，曬幹後除去灰塵，放入1%的石灰水中浸泡1~1.5天(氣溫高時間稍短，氣溫低時間稍長)，撈出淘洗至pH值7~7.5。
然後放入鍋中，加水煮，邊煮邊攪動麥粒，煮沸後保持20分鍾左右，以麥粒吸足水又破皮為度，麥粒含水量為50~55%。從鍋中撈出，待冷卻後加入石膏粉拌勻，即可裝瓶。一般選用750毫升的蘑菇瓶，裝至半瓶或大半瓶後，在麥粒表麵加一層稻草發酵料，防止幹燥。一般每100千克麥粒可裝500~600瓶。
(3)糞草菌種製作按稻(麥)草4~5份、糞5~6份的比例混合，進行堆製發酵。其腐熟度可稍生些，翻堆2~3次，一般堆製17~20天(麥草堆製20~25天)，然後將草料曬幹。製種時，將幹草料切成2~3厘米長的碎段，加入配料，加入1.5~1.6倍的清水拌濕，pH值調至7.2~7.5。1~2小時之後，水就已被吸入料內，此時即可裝瓶、打洞，將瓶口洗淨，塞上棉塞。
(4)種木菌種製作選一年生、直徑在1.5~2厘米內的樹枝，剪成1.2~1.5厘米長的小段，剪口要呈斜麵或製成三角形，曬幹保存備用。製種之前，先用1%的糖水浸泡18~24小時或煮沸1.5~2小時，撈出晾幹。按配方加入配料和水，拌勻裝瓶，在其表麵加蓋2厘米厚的木屑培養基。
3.原種、栽培種培養基的滅菌培養基配製好後，采用加熱滅菌的方法，殺死培養料內所有雜菌及其孢子。加熱滅菌常用高壓蒸汽滅菌和常壓蒸汽滅菌兩種方法。
(1)高壓蒸汽滅菌鍋內加水至規定水位，將待滅菌的菌種瓶或菌種袋放入鍋內，擺放時注意留些空隙，不能太擠。關嚴鍋蓋，防止漏氣，關上排氣閥，然後點燃熱源或通入蒸汽。當鍋內壓力上升至0.22~0.3千克/平方厘米時，緩慢打開放氣閥排出冷空氣，待壓力降至“0冶時，再關上排氣閥。此後，鍋內的溫度和壓力都會逐漸上升。原種或栽培種在1.5千克/平方厘米的壓力下持續1.5~2小時(聚乙烯袋在1千克/平方厘米的壓力下持續3~4小時)，即可達到滅菌的目的。然後關閉熱源，讓壓力自然降到“0冶，再緩慢打開排氣閥，排出水蒸氣。利用餘熱烘烤棉塞0.5~1天後，開蓋取出菌種瓶或菌種袋。
糞草菌種滅菌，一般在壓力為2千克/平方厘米下，維持2~3小時。
(2)常壓蒸汽滅菌將菌種瓶或菌種袋疊放在常壓滅菌灶內，瓶與瓶或袋與袋之間要留有空隙，使其均勻受熱，這樣便於蒸透。
然後用旺火迅速升溫到100℃，連續蒸煮6~8小時。停火後再用灶內的餘火燜一夜，即可達到滅菌效果。
(三)液體培養基的配製
1.液體菌種培養基的配方
配方一：葡萄糖3%，豆餅粉2%，玉米粉1%，酵母粉0.5%，磷酸二氫鉀0.1%，碳酸鈣0.2%，硫酸鎂0.05%，pH值自然。適用於多種食用菌的液體培養。
配方二：玉米粉3%~6%，蔗糖1%，磷酸二氫鉀0.3%，硫酸鎂0.15%，維生素B1微量，pH值自然。適用於平菇的培養。玉米粉含量為3%~4%時，培養液黏度低，但發酵期短(一般為4~5天)，菌絲團大，每毫升隻有8~10粒；玉米粉含量為5%~6%時，培養液黏度大，發酵周期一般為6~7天，但菌絲團小，每毫升有50粒左右，較適用於接種。
配方三：葡萄糖2.5%，酵母膏0.35%，玉米漿(含氮量7.1%)0.18%，磷酸二氫鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，氯化鈣0.006%，每升培養液內添加硫酸鋅4毫克，硫酸錳5毫克，檸檬酸鐵5毫克，維生素B10.1毫克。適用於培養茯苓。
2.液體菌種培養基的滅菌液體培養基配置好後，分裝入500毫升的三角瓶內，每瓶裝入100毫升，再放入10~15粒小玻璃珠或直徑在0.8厘米以下的玻璃碎片，用棉塞和牛皮紙封口。在1.5千克/平方厘米的壓力下，持續30分鍾，即可達到滅菌效果。取出後，冷卻至30℃以下接種。
菌種的接種
(一)各種無菌接種法的操作規程
1.接種箱操作規程
一是將接種箱放置於幹燥清潔的房間中進行。操作時，要緊閉窗戶，使室內無對流空氣。
二是在使用前一天，先進行甲醛熏蒸，然後密閉保持12小時以上。然後在接種箱內放入與甲醛等量的氨水，可以減少甲醛對人體的刺激，一般用量為2~6毫升/立方米。甲醛揮發可用酒精燈直接加熱熏蒸，或將甲醛一半用量的高錳酸鉀，加到甲醛中進行氧化而揮發。
甲醛也可用菇保一號代替。菇保一號是一種煙霧劑，無刺激性氣味。用時將塑料袋撕開，倒在紙上，用火點燃即可。
三是將接種瓶或接種袋和接種用具放入已滅菌的接種箱內，打開紫外線燈或臭氧燈20~30分鍾進行殺菌。沒有紫外線燈或臭氧燈，也可用5%石炭酸溶液或新潔爾滅溶液噴霧。
四是接種人員的雙手和菌種管、瓶、袋的外壁均要用75%的酒精棉球擦拭滅菌。
五是接種時，如果有掉落的菌塊或是打碎了有菌容器，要先用酒精棉球收拾幹淨，再繼續工作。接種時一定要注意安全，棉塞一旦著火，立即用手緊捏即可熄滅。
六是接種完畢後，將接種物與用具全部搬出接種箱，再用75%的酒精擦拭箱內的各個部位以及接種用具，使其保持清潔幹燥。補加燈用酒精，為下次接種做好準備。並開紫外線燈20分鍾進行殺菌。
2.接種室操作規程
一是使用前一天，先在緩衝間和培養室噴少量的5%石炭酸，將已滅菌的培養基、所需器材、用具及工作衣帽等放入緩衝室中，再關閉門窗進行甲醛(或菇保一號)熏蒸滅菌。
二是先穿好無菌工作服和鞋，戴好口罩、帽子，然後將所需的物品搬入接種室內。檢查各種用具是否齊備。然後在工作台上方及室內各處噴菇保一號，並開紫外線燈10~16分鍾再次殺菌。
三是接種時，要求動作迅速、輕巧，盡量減少汙染的機會。用過的火柴杆、棉球以及一些廢物要放入容器內，不可丟在地上。其他方麵與接種箱的操作要求相同。
四是接種完畢，將東西搬出，將桌麵收拾幹淨，用殺菌藥液擦淨台麵和地麵。
3.超淨工作台操作規程
一是將接種瓶或接種袋和接種用具放入已滅菌的接種室內，打開紫外線燈或臭氧燈20~30分鍾殺菌。如果沒有紫外線燈或臭氧燈，也可用5%石炭酸溶液或新潔爾滅溶液噴霧。
二是開動機器，等機器正常運轉20分鍾後，操作區的空氣淨化完成，再進行接種。
三是工作人員必須穿無菌工作服和鞋，戴口罩和帽子。
四是將接種用具放在台麵兩側或下風側，操作人員的手置於接種材料的下風側。
五是工作時，嚴禁搔頭、快步走動和推拉門等一些發塵量大的動作。
六是接種操作時，動作力求迅速、輕巧，盡量減少汙染的機會。
用過的火柴杆、棉球以及一些廢物要放入容器內，不得丟在地上。
七是接種完畢，把東西搬出，將桌麵收拾幹淨，用殺菌藥液擦淨台麵及地麵。
(二)接種
要嚴格遵守無菌操作規程，在接種箱、接種室內或超淨工作台上接種。
1.母種接種
(1)母種接種方法要選用那種菌絲長滿管的母種，這種母種在轉接後，不易造成汙染。接種前，要對菌種的質量進行嚴格檢查，染有雜菌的菌種不能使用。另外，還要檢查棉塞是否染有雜菌。
先拔掉棉塞，然後將試管口置於酒精燈火焰處封燒。拔下的棉塞不可隨意擺放在未經消毒滅菌的物品上，應該夾在右手的指縫間。
左手執菌種管和空白培養基管，右手執接種工具。先將接種刀在酒精燈火焰上加熱滅菌，待刀麵稍涼後在斜麵的中央割一刀，把斜麵菌種分為兩部分。用滅菌接種鉤作垂直的切割，將斜麵菌種切分成20~40塊。再用平頭接種鏟，帶瓊脂鏟薄薄的1塊，接種在斜麵培1.用試管支架固定母種2.手持母種養基的中央。需要注意的是，瓊脂塊菌絲麵要朝上，以使氣生菌絲和基質菌絲能同時得到發育。接種時，管口不得離開酒精燈火焰形成的無菌區，接菌用具每次都必須在酒精燈上過火滅菌消毒。接種完畢後，將管口放於在酒精燈火焰上進行灼燒，然後塞上棉塞。最好在無菌室內多準備一些滅過菌的備用棉塞，以便在接種時隨時替換受潮的棉塞。
一支母種可擴大20~30支，這種母種的擴大培養，叫做轉管。
一般轉管不能超過5次，否則容易造成菌種衰退變異。接種後應置於黑暗中恒溫培養。
(2)酵母型母種接種方法適用於培養銀耳芽孢等。