本項目按照GB/T 5009.157—2003《食品中有機酸的測定方法》測定。
1.範圍
規定了測定食品中有機酸（酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、丁二酸）的高效液相色譜法。
適用於果蔬及其製品、飲料等食品中有機酸含量的測定。
檢出限為：酒石酸0.1μg/mL、蘋果酸0.3μg/mL、檸檬酸0.5μg/mL、丁二酸2.0μg/mL。
2.原理
食品試樣經勻漿提取、離心後，樣液經0.3μm濾膜抽濾，以（NH4）2HPO4-H3PO4緩衝溶液（pH2.7）為流動相，用高效液相色譜法在C18色譜柱上分離，於210nm處經紫外檢測器檢測，用峰高或峰麵積標準曲線測定有機酸的含量。
3.試劑
所用試劑為分析純，試驗用水為重蒸水或同等純度的水，經0.45μm濾膜真空抽濾。
(1)磷酸（1mol/L）；
(2)磷酸氫二銨溶液（1mol/L）；
(3)乙醇（80％）；
(4)有機酸標準溶液：稱取酒石酸、蘋果酸、檸檬酸各0.5000g；丁二酸0.1000g；用超濾水溶解後，定容至50mL。酒石酸、蘋果酸、檸檬酸的濃度分別為10.0mg/mL，丁二酸為2.0mg/mL，此液為標準儲備液。標準使用液：取5.00mL標準儲備液於50mL容量瓶中用超濾水稀釋到刻度。酒石酸、蘋果酸、檸檬酸的濃度分別為1.0mg/mL，丁二酸為0.2mg/mL。
4.儀器
（1）組織搗碎機；
（2）恒溫水浴箱；
（3）高效液相色譜儀，配紫外可見光檢測器；
（4）酸度計；
（5）針頭過濾器，0.3μm合成纖維樹脂濾膜。
5.分析步驟
試樣處理：
①固體試樣：稱取50g試樣於組織搗碎機中，加入100mL 80％乙醇，勻漿1min。取一定量勻漿（相當於5g試樣）以3000r/min離心10min分出上清液，轉入50mL容量瓶中，殘渣再用80％乙醇洗滌兩次，每次15mL，離心10min，合並上清液，加80％乙醇至刻度，混勻，此液為提取液。取5.00mL提取液於蒸發皿中，在70℃恒溫水浴上蒸去乙醇，殘留物用重蒸水定量轉入10mL具塞比色管內，加入1mol/L磷酸（H3PO4）0.2mL，用重蒸水定容到10mL，混勻。取部分樣液經內裝0.3μm濾膜的針頭過濾器過濾，濾液供高效液相色譜分析用。
②液體試樣：準確吸取5.00mL試樣（若試樣中含二氧化碳應先加熱除去；若試樣中含有人工合成色素應先加入聚酰胺粉於70℃水浴中加熱脫色，樣液在3000r/min下離心10min，再取上清液），加入0.2mL1mol/L磷酸，用重蒸水稀釋至10mL，經0.3μm濾膜過濾，濾液供分析用。
6.測定
（1）色譜條件
①預柱：C18柱，10μm，4.6mm×30mm。
②分析柱：C18柱，5μm，4.6mm×250mm。
③流動相：0.01mol/L磷酸氫二銨，用1mol/L磷酸調至pH2.70，臨用前用超聲波脫氣。
④ 流速：1mL/min。
⑤ 進樣量：20μL。
⑥ 紫外檢測器波長：210nm。
（2）標準曲線的繪製取標準使用液0.50、1.00、2.00、5.00、10.00mL，加入0.2mL1mol/L磷酸，用超濾水稀釋至10mL，混勻。進樣20μL，於210nm處測量峰高或峰麵積，每個濃度重複進樣2～3次，取平均值。以有機酸的濃度為橫坐標，色譜峰高或峰麵積的均值為縱坐標，繪製標準曲線或經過線性回歸得出回歸方程。
（3）試樣測定在與繪製標準曲線相同的色譜條件下，取20μL試樣液注入色譜儀，根據標準曲線或線性回歸方程，求出樣液中有機酸的濃度。
7.結果計算
8.精密度
在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的9％。