2.8加樣回收率試驗 取同一批號（批號1010158）已知30頭三七蒸製10 h供試品6份，分別精密加入等同於樣品含量的10種人參皂苷化合物對照品，按2.2項下方法製備，以2.3項下色譜條件進樣2 μL，人參皂苷Rg6，F4，Rk3，Rh4，20（S）-Rg3，20（R）-Rg3，Rk1，Rg5，20（S）-Rh2，20（R）-Rh2的平均回收率分別為97.00%，97.96%，98.86%，95.27%，98.67%，98.02%，95.53%，96.63%，99.57%，103.6%；RSD分別為1.7%，0.41%，0.45%，0.56%，1.7%，3.9%，0.51%，0.48%，3.5%，1.5%。
2.9樣品的測定 取不同頭數、不同部位、蒸製不同時間後的三七飲片，按2.2項下方法和2.3項下色譜條件進行含量分析。
3討論與結論
近年來對三七的蒸製研究日益增多，但文獻大多以生三七為研究對象，研究蒸製時皂苷成分含量的變化、結構的轉變以及蒸製後產生的部分微量次級皂苷的定性、鑒別[4-6，14]。尚未見從炮製角度出發的關於蒸製三七飲片的質量控製方麵的研究報道。由於目前國內臨床應用和國外藥店銷售三七既有生三七也有熟三七，因此以蒸製三七為研究對象，對其蒸製過程所產生的成分進行定量和質量控製研究，為製定合理的蒸製三七炮製規範和質量標準奠定基礎。
近年來采用能夠體現中藥整體性特征的多成分含量測定法來控製中藥的質量已成為共識[15]。實驗中發現人參皂苷20（R/S）-Rh1是蒸製過程中顯著增加的成分，但其保留時間與人參皂苷20（R/S）-Rg2，三七皂苷R2非常接近，色譜峰無法完全分開，易被幹擾，因此未選擇人參皂苷20（R/S）-Rh1作為蒸製三七的專屬性指標成分。筆者結合相關文獻選擇分離度好且生三七中幾乎不存在的人參皂苷 Rg5，Rh4，Rk1，Rk3，20（R/S）-Rh2和生三七中少量存在，蒸製三七中大量增加的人參皂苷20（R/S）-Rg3，以及前期試驗研究在蒸製三七中分離得到其特有的人參皂苷Rg6，F4這10個活性成分作為蒸製三七的專屬性指標成分。以期盡可能反映的蒸製三七的內在特性並進行質量控製。
本實驗比較了50%，70%，85%甲醇、甲醇等不同溶媒的提取效率及提取方法和提取時間，發現采用甲醇超聲提取蒸製三七粉末40 min，可較好的將偏脂溶性的皂苷類成分較完全的提取出來，方法簡便、易行。本實驗比較了不同長度的色譜柱，發現雖然5 cm長的色譜柱平衡時間和分析時間短，但10 cm長的色譜柱的分離度要好於5 cm；比較了20，25，30，35，40 ℃等不同柱溫對色譜峰分離的影響，結果顯示柱溫在35 ℃時，供試品分離度較好，分析時間適宜。由於所測皂苷類成分在低波長下有末端吸收，故選擇203 nm作為檢測波長。選擇在低波長下自身溶劑吸收幹擾比較小的乙腈為流動相，並采用乙腈-水溶液二元梯度洗脫，利於多成分的分離。
筆者以不同頭數、不同蒸製時間三七飲片為研究對象，通過預實驗，選取上述10個活性成分為檢測指標，通過同一色譜條件下的含量測定來控製蒸製三七的內在質量。結果表明，不同頭數蒸製三七中10種皂苷類活性成分的含量存在差異，其中20，30，40頭蒸製三七含量略大於60，80，100頭，一般差異在1～2倍之間，個別指標達到2～3倍。實驗結果提示三七蒸製後，原先三七不同頭數之間質量較大的差異變小，說明蒸製可使不同規格的三七質量均一化，有利於蒸製三七的質量控製和體現臨床療效。另外，不同藥用部位蒸製三七根須中10種皂苷類活性成分的含量與60，80，100頭蒸製三七基本相同。提示三七根須蒸製後也可作為熟三七使用。在不同蒸製時間點的10種皂苷類活性成分的含量變化趨勢基本一致，變化規律均表現為隨著時間的延長，10種皂苷類活性成分的含量均不同程度的增加。其中人參皂苷Rg5，Rh4的含量隨著時間的延長增加最多，人參皂苷20（R/S）-Rh2則增加最少，其它幾種成分含量的增加相差不大，變化趨勢介於前兩者之間。提示10種皂苷類活性成分在蒸製過程中的含量是動態變化、整體上是不斷增加的，蒸製10～12 h後各活性成分的增加趨勢趨於平緩。蒸製時間對三七規範化炮製有重要影響，它決定了蒸製三七的內在質量。
本文采用UPLC建立了蒸製三七皂苷類多成分含量測定方法，並對不同頭數、不同藥用部位、不同蒸製時間的多成分指標進行了含量測定。本研究既提供了一種快速、準確、重複性好、分離度高的方法，又可為全麵控製蒸製三七的質量，製定其規範化炮製工藝和質量標準，確保其臨床療效的可靠性與一致性奠定基礎。本文不僅對三七蒸製品質量控製有實際意義，同時對同屬植物來源中藥（如人參、西洋參、竹節參等）的炮製品質量控製也有一定借鑒作用。
[參考文獻]
[1] Dong T X， Cui X M， Song Z H， et al. Chemical assessment of roots of Panax notoginseng in China regional and seasonal variations in its active constituents [J]. J Agric Food Chem， 2003， 51：4617.
[2] 劉旭，李明春，徐霞，等. 中藥三七對大鼠心肌缺血保護作用的譜效學研究[J]. 中國現代應用藥學，2013，30（8）：819.
[3] 葉定江，張世臣，陳奇. 中藥炮製學 [M]. 上海：上海科學技術出版社， 1996：208.
[4] Chan E C Y， Yap S L， Lau A J， et al. Ultra-performance liquid chromatography / time-of-flight mass spectrometry based metabolomics of raw and steamed Panax notoginseng [J]. Rapid Commun Mass Spectrom， 2007， 21：519.
[5] Wang D， Liao P Y， Zhu H T， et al. The processing of Panax notoginseng and the transformation of its saponin components [J]. Food Chem， 2012， 132：1808.
[6] Toh D F， New L S， Koh H L， et al. Ultra-high performance liquid chromatography / time-of-flight mass spectrometry （UHPLC/TOFMS） for time-dependent profiling of raw and steamed Panax notoginseng [J]. J Pharm Biomed Anal， 2010， 52：43.
[7] Chen Bin， Shen Yuping， Zhang Dongfeng， et al. The apoptosis-inducing effect of ginsenoside F4 from steamed notoginseng on human lymphocytoma JK cells[J]. Nat Prod Res， 2013， Doi：10. 1080/14786419. 2013. 828290.